应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白原核表达
171/2返回列表12下一页
查看: 1573  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

[求助] 蛋白原核表达 已有3人参与

最近在做蛋白质原核表达，目的蛋白80KD ，选用pGEX-4T-1载体、21度 、终浓度0.1mM IPTG 诱导过夜 ，SDS-PAGE发现上清中也有蛋白 ，但是表达量不多
，将得到的上清蛋白和GST beads 孵育  ，蛋白几乎不和GST-beads 结合 。请问是什么原因 ？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
岁月静好
1楼 2015-03-21 17:23:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

781055707

木虫 (著名写手)
楼主pGEX-4T-1载体可以给我一点吗？我可以给你pet28a质粒和BL21(DE3)的感受态。邮费都我出。
赞一下(1人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-21 17:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能只是大小一样，但不是目的蛋白吧。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-03-21 17:26:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-21 17:26:36
可能只是大小一样，但不是目的蛋白吧。

是说我的蛋白没有表达的意思么？
赞一下 回复此楼
岁月静好
3楼2015-03-21 17:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2015-03-21 17:28:13
是说我的蛋白没有表达的意思么？...

不是，在上清里的可能不是，你的蛋白可能在沉淀里。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2015-03-21 17:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
蛋白几乎不和GST-beads 结合，你是做了Western blotting吗，那也可能是单抗或二抗的问题。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2015-03-21 17:32:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
5楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-21 17:30:01
不是，在上清里的可能不是，你的蛋白可能在沉淀里。...

沉淀里也有 和上清比量差的不是特别多 同学说我的诱导条件不是很理想要再摸下 我的主要疑问是为什么GST beads 拉不下来融合蛋白  是不是诱导温度高了 导致蛋白折叠错误 影响和beads 结合？
赞一下 回复此楼
岁月静好
7楼2015-03-21 17:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
6楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-21 17:32:06
蛋白几乎不和GST-beads 结合，你是做了Western blotting吗，那也可能是单抗或二抗的问题。

没有做western
回复此楼
岁月静好
8楼2015-03-21 17:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-21 17:29:02
楼主pGEX-4T-1载体可以给我一点吗？我可以给你pet28a质粒和BL21(DE3)的感受态。邮费都我出。

可以啊  可是载体菌液要怎么寄？
赞一下 回复此楼
岁月静好
9楼2015-03-21 17:39:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Phoebe.Lee at 2015-03-21 17:36:26
沉淀里也有 和上清比量差的不是特别多 同学说我的诱导条件不是很理想要再摸下 我的主要疑问是为什么GST beads 拉不下来融合蛋白  是不是诱导温度高了 导致蛋白折叠错误 影响和beads 结合？...

诱导条件没什么大问题，你可以试下1MOL诱导，pGEX-4T-1载体里自带的GST 不会蛋白折叠错误，也可能是GST beads 出问题了，你可以买个GST 的1抗，做个Western。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
10楼2015-03-21 17:42:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Phoebe.Lee 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭