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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白表达纯化问题
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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白表达纯化问题 已有5人参与

去年做的原核表达，成功构建了表达菌株，诱导表达量很高，纯化效果也较好，就保了菌种，今年直接将菌种活化了，也做pcr鉴定了，再诱导表达怎么表达量变得很低，不知道为什么，而且纯化也没纯化出来，请大家帮帮忙，谢谢！
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1楼 2015-03-12 12:45:22
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九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的保种菌是什么菌？以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题：原来是可溶表达，保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见：
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗？
2. 你可以再次划板，挑取阳性克隆多个鉴定后做表达试验。
3. 分析你这次的表达条件是否有所不同。
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6楼2015-03-13 15:44:31
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新转质粒，挑选单克隆，从头再做一遍表达纯化
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2015-03-12 14:31:46
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lomis

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌株退化了，可涂抗性版挑几个单克隆再表达，如都较低，再重新构建载体转化。
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没有命运，只有选择！
3楼2015-03-12 15:14:37
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lomis at 2015-03-12 15:14:37
菌株退化了，可涂抗性版挑几个单克隆再表达，如都较低，再重新构建载体转化。

原先构建的载体质粒也保存了，重新转化会不会好些
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4楼2015-03-12 16:20:02
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