应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白表达纯化问题
191/2返回列表12下一页
查看: 2092  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白表达纯化问题 已有5人参与

去年做的原核表达，成功构建了表达菌株，诱导表达量很高，纯化效果也较好，就保了菌种，今年直接将菌种活化了，也做pcr鉴定了，再诱导表达怎么表达量变得很低，不知道为什么，而且纯化也没纯化出来，请大家帮帮忙，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-12 12:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新转质粒，挑选单克隆，从头再做一遍表达纯化
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2015-03-12 14:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lomis

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌株退化了，可涂抗性版挑几个单克隆再表达，如都较低，再重新构建载体转化。
赞一下 回复此楼
没有命运，只有选择！
3楼2015-03-12 15:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lomis at 2015-03-12 15:14:37
菌株退化了，可涂抗性版挑几个单克隆再表达，如都较低，再重新构建载体转化。

原先构建的载体质粒也保存了，重新转化会不会好些
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-12 16:20:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-03-12 14:31:46
重新转质粒，挑选单克隆，从头再做一遍表达纯化

好的，谢谢
回复此楼
5楼2015-03-12 16:21:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的保种菌是什么菌？以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题：原来是可溶表达，保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见：
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗？
2. 你可以再次划板，挑取阳性克隆多个鉴定后做表达试验。
3. 分析你这次的表达条件是否有所不同。
赞一下 回复此楼
6楼2015-03-13 15:44:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 九字江山 at 2015-03-13 15:44:31
你的保种菌是什么菌？以前我做蛋白表达纯化时也曾出现类似问题：原来是可溶表达，保存后活化再表达却是包涵体。给你以下几个意见：
1. 你酶切鉴定的质粒是你未表达的菌液里提出的吗？
2. 你可以再次划板，挑取阳性 ...

我保的是BL21，我也发现和你类似的结果，活化的菌表达蛋白做可溶性分析，上清中的含量降低了很多。我是从未表达的菌液中抽提的质粒，现在做转化了，不知道后面表达怎么样，再次划板还是划我保的菌液吗？挑取多个克隆若鉴定都是阳性的话都要逐个进行表达实验的吗，谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-13 16:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by flll2014 at 2015-03-13 16:55:03
我保的是BL21，我也发现和你类似的结果，活化的菌表达蛋白做可溶性分析，上清中的含量降低了很多。我是从未表达的菌液中抽提的质粒，现在做转化了，不知道后面表达怎么样，再次划板还是划我保的菌液吗？挑取多个克 ...

BL21(DE3)或BL21不适合作保种用，是表达用菌，容易出现质粒丢失的情况。先试试转化后的吧，当初我是重新做的。。。
赞一下 回复此楼
8楼2015-03-13 17:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 九字江山 at 2015-03-13 17:20:23
BL21(DE3)或BL21不适合作保种用，是表达用菌，容易出现质粒丢失的情况。先试试转化后的吧，当初我是重新做的。。。...

你是重新构建的载体再做的吗？我是第一次做表达时就把质粒提出来了，质粒和菌种都保存的，现在应该重新转化下就可以了吧。你重新做后效果好了吗
赞一下 回复此楼
9楼2015-03-13 21:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by flll2014 at 2015-03-13 21:00:56
你是重新构建的载体再做的吗？我是第一次做表达时就把质粒提出来了，质粒和菌种都保存的，现在应该重新转化下就可以了吧。你重新做后效果好了吗...

是啊，重组后就成功了。祝你好运
赞一下 回复此楼
10楼2015-03-16 09:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flll2014 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料299专硕求调剂 +6 +21 2026-04-09 6/300 2026-04-09 12:29 by ??⒍
[考研] 一志愿上海大学生物学346 +4 上海大学346调剂 2026-04-03 4/200 2026-04-09 10:52 by yiminglu
[考研] 086000调剂 +4 十七sa 2026-04-07 4/200 2026-04-09 09:27 by 壹往無前
[考研] 0703调剂 +17 拾玖壹 2026-04-04 19/950 2026-04-09 09:18 by may_新宇
[考研] 一志愿北京2，材料与化工308求调剂 +17 熊二想上岸 2026-04-04 18/900 2026-04-09 09:13 by leyan1127
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +15 努力奋斗112 2026-04-06 17/850 2026-04-08 22:27 by 凯凯要变帅
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +11 Naiko 2026-04-04 11/550 2026-04-08 14:00 by wutongshun
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[论文投稿] Decision: Revise for Editor还会送审吗 100+3 CccccccccFD 2026-04-04 5/250 2026-04-07 10:58 by 北京莱茵润色
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 一志愿国科大信工所,英二数二408总分293分求调剂 +3 ilcyuan 2026-04-02 4/200 2026-04-06 16:35 by likeihood
[考研] 0857大类环境工程B区求调剂 +3 龚禹铭 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +15 路痴小琪 2026-04-05 15/750 2026-04-06 09:27 by cql1109
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸！ 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-05 16:34 by imissbao
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +4 zhouzhen654 2026-04-03 4/200 2026-04-04 18:10 by 猪会飞
[考研] 一志愿0817化学工程与技术，求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 一志愿安徽大学0817化学工程与技术，求调剂 +14 我不是只因 2026-04-02 15/750 2026-04-03 09:49 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭