24小时热门版块排行榜    

查看: 3502  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tianti_121

新虫 (小有名气)

[求助] PCR条带淡,怎样优化?(如图) 已有12人参与

菌液PCR,反应体系:菌液0.5,引物各1,Fastpfu buffer 5,dNTP 2.5,Fastpfu酶 0.5,ddH2O 14.5,共25微升。

PCR程序:94℃ 4min,
                 94℃ 30s
                 62℃ 30s
                 72℃ 2min
                 35个循环
                 72℃  10min

目的基因大概1300多bp.

求优化条件!十分感谢!

PCR条带淡,怎样优化?(如图)
高保真菌液PCR.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
tianti_121: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-30 09:38:49
菌液量加1ul就可以了。别的不用变。
10楼2014-12-28 14:32:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-28 23:05:11
优化下退火温度吧,一般不会那么高。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-12-28 12:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianti_121

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-12-28 12:03:51
优化下退火温度吧,一般不会那么高。

合成的引物上游退火温度62.67,下游67.75。请问设计多少合适?
3楼2014-12-28 12:19:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:06:51
额,那个不准的,一般常用是54-56,极端情况可以更高或更低。我一般前用54度试试,不行就做退火温度梯度。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-12-28 12:30:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +15 Lanmanbaby 2026-08-09 23/1150 2026-08-11 09:51 by demonstreets
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +5 瞬息宇宙 2026-08-10 5/250 2026-08-11 09:29 by 铁帽子农民
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
请填处理意见