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searush

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 western blot 已有4人参与

请问WB的内参怎么和样品一起跑胶,还有怎么定量蛋白样品及怎么保存蛋白?越具体越好,(本人是新手,求各位大虫帮帮忙)还有湿转60KD左右蛋白条件?
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学术研究
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Eva-wen

新虫 (初入文坛)

WB内参与样品同时跑的条件是样品的分子量必须和内参分子量相差较大,不然切胶很难分开两者。蛋白样品定量方法我用的是碧云天BCA法。一般蛋白保存在-20度冰箱。湿转不太清楚,我一般用的是半干转60KD是1.5h
8楼2015-03-24 09:46:49
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searush

铜虫 (初入文坛)

大虫们  帮帮忙吧
学术研究
2楼2014-12-26 10:56:47
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mumu624

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
searush(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-26 20:21:57
目前测定蛋白浓度的方法有很多,BCA或者FOLIN-酚等方法都比较常用;如果是煮完的蛋白保存的话四度和-20度都可以,但是温度低的肯定保存时间长;60kD的蛋白湿转我们一般采用的是冰浴中,横流300mM,2h,效果不错。
3楼2014-12-26 17:58:25
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searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mumu624 at 2014-12-26 17:58:25
目前测定蛋白浓度的方法有很多,BCA或者FOLIN-酚等方法都比较常用;如果是煮完的蛋白保存的话四度和-20度都可以,但是温度低的肯定保存时间长;60kD的蛋白湿转我们一般采用的是冰浴中,横流300mM,2h,效果不错。

请问蛋白怎么变性保存 需要跟上样缓冲液一起煮吗?上样缓冲液用非变性的缓冲液行吗?
学术研究
4楼2014-12-27 17:12:14
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