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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 western blot
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searush

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 western blot 已有4人参与

请问WB的内参怎么和样品一起跑胶，还有怎么定量蛋白样品及怎么保存蛋白？越具体越好，（本人是新手，求各位大虫帮帮忙）还有湿转60KD左右蛋白条件？
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学术研究
1楼 2014-12-25 21:55:25
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Eva-wen

新虫 (初入文坛)
WB内参与样品同时跑的条件是样品的分子量必须和内参分子量相差较大，不然切胶很难分开两者。蛋白样品定量方法我用的是碧云天BCA法。一般蛋白保存在-20度冰箱。湿转不太清楚，我一般用的是半干转60KD是1.5h
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8楼2015-03-24 09:46:49
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Eva-wen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by searush at 2014-12-27 17:12:14
请问蛋白怎么变性保存 需要跟上样缓冲液一起煮吗？上样缓冲液用非变性的缓冲液行吗？...

是的，变形是为了将SDS与蛋白质充分结合，使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷。上样蛋白就是蛋白和上样缓冲液等比例配制，98度煮10分钟.
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9楼2015-03-24 09:55:23
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