24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1372  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

生技101

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增基因 已有3人参与

最近,在做PCR扩增目的基因,1212bp长度。设计的上游引物加有酶切位点和标签序列,送测序合成的时候,引物的退火温度,公司给计算的也包括酶切位点和标签序列在内,但是那个不会和模板特异性结合啊?还有就是做的时候,有的时候扩增的出来,但是都是呈现弥散状,甚至没有目的条带。而有时干脆就没有条带,是什么原因呢?一直也没有弄明白。求虫友的解答,不甚感激!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:42:40
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还 ...

嗯嗯,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-12-14 17:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:47:18
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-12 18:25:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2014-12-12 18:25:19
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

做过PCR,从58到63度,但是结果也是不好。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-12-12 20:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:51
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还是不行,试着加点DMSO试试
医学&统计学
4楼2014-12-14 12:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-14 7/350 2026-04-15 14:39 by 黑科技花岗岩
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +43 xaw. 2026-04-11 44/2200 2026-04-15 12:46 by 西北望—风沙
[考研] 通信工程求调剂!!! +4 zlb770521 2026-04-14 4/200 2026-04-14 18:19 by lbsjt
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +21 hualkop 2026-04-12 22/1100 2026-04-14 17:44 by lhj2009
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +19 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 20/1000 2026-04-14 16:03 by zs92450
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +26 土豆er? 2026-04-09 29/1450 2026-04-13 15:15 by 独醉梦孤城
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +11 池池池池池池 2026-04-08 11/550 2026-04-13 14:10 by 科研论
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 电子信息279求调剂,有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 本人女孩 +7 吼吼, 2026-04-10 9/450 2026-04-11 14:45 by ACS Nano——
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
信息提示
请填处理意见