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生技101

新虫 (小有名气)

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[求助] PCR扩增基因已有3人参与

最近，在做PCR扩增目的基因，1212bp长度。设计的上游引物加有酶切位点和标签序列，送测序合成的时候，引物的退火温度，公司给计算的也包括酶切位点和标签序列在内，但是那个不会和模板特异性结合啊？还有就是做的时候，有的时候扩增的出来，但是都是呈现弥散状，甚至没有目的条带。而有时干脆就没有条带，是什么原因呢？一直也没有弄明白。求虫友的解答，不甚感激！！！

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1楼 2014-12-12 15:00:39

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:42:40
首先确定引物是合适的，其次就要看PCR的体系，模板浓度不能太高，引物浓度也要低一点，否则会有引物二聚体，温度可以再降，不管有无杂带，先把目的基因P出来，然后把目的基因切胶回收，再以这个为模板做扩增，如果还 ...

嗯嗯，谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]

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