24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1369  |  回复: 10

生技101

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增基因 已有3人参与

最近,在做PCR扩增目的基因,1212bp长度。设计的上游引物加有酶切位点和标签序列,送测序合成的时候,引物的退火温度,公司给计算的也包括酶切位点和标签序列在内,但是那个不会和模板特异性结合啊?还有就是做的时候,有的时候扩增的出来,但是都是呈现弥散状,甚至没有目的条带。而有时干脆就没有条带,是什么原因呢?一直也没有弄明白。求虫友的解答,不甚感激!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Mis_Q

银虫 (小有名气)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:59
我是引物本来扩增效率就不高,加了酶切位点完全没有产物,基本都是非特异性小片段。最近一直在摸索,昨天把那个位置的胶回收下来,准备再试试,还是不行的话就要考虑换引物了。一起加油!
8楼2014-12-17 09:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:47:18
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-12 18:25:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2014-12-12 18:25:19
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

做过PCR,从58到63度,但是结果也是不好。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-12-12 20:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:51
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还是不行,试着加点DMSO试试
医学&统计学
4楼2014-12-14 12:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:42:40
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还 ...

嗯嗯,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-12-14 17:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 生技101 at 2014-12-14 17:39:26
嗯嗯,谢谢
...

我做了几天,也都是这样子,打算做条件的优化
6楼2014-12-15 20:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2014-12-15 20:42:43
我做了几天,也都是这样子,打算做条件的优化...

嗯嗯,加油

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-12-16 10:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Mis_Q at 2014-12-17 09:23:34
我是引物本来扩增效率就不高,加了酶切位点完全没有产物,基本都是非特异性小片段。最近一直在摸索,昨天把那个位置的胶回收下来,准备再试试,还是不行的话就要考虑换引物了。一起加油!

我改的模板是oligo DT,然后就出来了… 之前是随机引物做的pcr。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2014-12-18 15:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2014-12-18 15:35:29
我改的模板是oligo DT,然后就出来了… 之前是随机引物做的pcr。...

我的也是,但是就是扩增不出来,现在没有再做PCR,但是觉得以后那肯定还是个问题

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-12-18 18:23:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生技101 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +32 yzyzx 2026-04-12 36/1800 2026-04-14 17:45 by lhj2009
[考研] 297,工科调剂? +6 河南农业大学-能 2026-04-14 6/300 2026-04-14 16:04 by Art1977
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+6 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 28/1400 2026-04-14 15:44 by zs92450
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 机械还有还有名额吗?太难了 +8 笑笑袁 2026-04-10 8/400 2026-04-14 08:44 by screening
[考研] 085404 298分求调剂 +11 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 12/600 2026-04-14 08:38 by wfj257
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +4 双一流本科机械 2026-04-08 4/200 2026-04-14 07:32 by Abskk
[考研] 0854调剂 +12 长弓傲 2026-04-09 13/650 2026-04-12 09:56 by 逆水乘风
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂,接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见