24小时热门版块排行榜    

查看: 1523  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

生技101

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增基因 已有3人参与

最近,在做PCR扩增目的基因,1212bp长度。设计的上游引物加有酶切位点和标签序列,送测序合成的时候,引物的退火温度,公司给计算的也包括酶切位点和标签序列在内,但是那个不会和模板特异性结合啊?还有就是做的时候,有的时候扩增的出来,但是都是呈现弥散状,甚至没有目的条带。而有时干脆就没有条带,是什么原因呢?一直也没有弄明白。求虫友的解答,不甚感激!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mis_Q

银虫 (小有名气)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:59
我是引物本来扩增效率就不高,加了酶切位点完全没有产物,基本都是非特异性小片段。最近一直在摸索,昨天把那个位置的胶回收下来,准备再试试,还是不行的话就要考虑换引物了。一起加油!
8楼2014-12-17 09:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:47:18
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-12 18:25:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2014-12-12 18:25:19
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

做过PCR,从58到63度,但是结果也是不好。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-12-12 20:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:51
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还是不行,试着加点DMSO试试
医学&统计学
4楼2014-12-14 12:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +3 木水思豆 2026-08-25 3/150 2026-08-25 20:49 by iwuli
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +14 angus9576 2026-08-25 17/850 2026-08-25 20:24 by huagongfeihu
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 什么时候开奖? +12 CrisMessi 2026-08-18 13/650 2026-08-25 14:40 by ZJTJZ
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见