24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1360  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

生技101

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增基因 已有3人参与

最近,在做PCR扩增目的基因,1212bp长度。设计的上游引物加有酶切位点和标签序列,送测序合成的时候,引物的退火温度,公司给计算的也包括酶切位点和标签序列在内,但是那个不会和模板特异性结合啊?还有就是做的时候,有的时候扩增的出来,但是都是呈现弥散状,甚至没有目的条带。而有时干脆就没有条带,是什么原因呢?一直也没有弄明白。求虫友的解答,不甚感激!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:51
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还是不行,试着加点DMSO试试
医学&统计学
4楼2014-12-14 12:42:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-12 18:47:18
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-12 18:25:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 狮子山下君 at 2014-12-12 18:25:19
可以做一个梯度PCR,摸索一下退火温度!

做过PCR,从58到63度,但是结果也是不好。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-12-12 20:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生技101

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:42:40
首先确定引物是合适的,其次就要看PCR的体系,模板浓度不能太高,引物浓度也要低一点,否则会有引物二聚体,温度可以再降,不管有无杂带,先把目的基因P出来,然后把目的基因切胶回收,再以这个为模板做扩增,如果还 ...

嗯嗯,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-12-14 17:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 290求调剂 +17 luoziheng 2026-04-10 17/850 2026-04-14 08:52 by 木木mumu~
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 297求调剂 +22 ORCHID1 2026-04-10 25/1250 2026-04-13 23:11 by pies112
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 53/2650 2026-04-13 14:20 by 张zhihao
[考研] 366求调剂 +9 不知名的小卅 2026-04-11 9/450 2026-04-13 01:19 by 幸免 ..
[考研] 322求调剂,08工科 +4 今天是个小号 2026-04-08 4/200 2026-04-13 00:20 by baobaoye
[考研] 电子信息270求调剂 +18 terminal469 2026-04-07 18/900 2026-04-12 16:23 by ajpv风雷
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 一志愿京区985,085401电子信息,本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 一志愿沪9,326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 一志愿中科大070300化学,314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
请填处理意见