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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 有谁做过TEV酶，我做出来没有酶活，是怎么回事？
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树苗儿

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1楼 2014-12-11 13:41:23
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-12-12 12:24:48
有以下几种可能
（1）蛋白表达没有活性
（2）纯化过程失活
（3）透析过程失活
（4）冻干过程失活
PS，你的冻干参数是什么？冻干前做过酶活实验吗？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-12-11 22:49:08
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-12 12:25:00
我去，为什么要冻干啊 直接冻起来分装就好了
还有你纯化的时候没有加蛋白酶抑制剂吧？反正我纯化的时候连PMSF都不敢加。。。
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树苗儿
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-12-12 04:54:51
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树苗儿

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4楼2014-12-16 21:46:46
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5楼2014-12-16 21:48:22
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
5楼: Originally posted by 树苗儿 at 2014-12-16 01:48:22
没有加蛋白酶抑制剂的，我重新纯化了一批，是有活性的，应该是冻干的问题，请问你做过TEV酶吗？我有一个融合蛋白切开了，一个融合蛋白切不开...

切不开是说完全切不开，还是说只有20-30%切开了？
完全切不开的话你最好检查一下蛋白序列，还有缓冲液pH,里面不要有SDS之类的能让蛋白失活的
要是能切开一点你就使劲加大用量吧，用0.2mg/ml，有的时候效率就是不太好
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树苗儿
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2014-12-17 00:50:21
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树苗儿

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7楼2014-12-17 10:03:37
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