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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » NaK ATP 酶活性实验做不出数据
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tianhaiyan01

铁虫 (小有名气)

[求助] NaK ATP 酶活性实验做不出数据

筛药物活性，测药物对NaK ATP 酶的抑制作用，买了sigma 的试剂，用了比色法。原理是检测ATP释放的磷酸盐的含量。我用空白的ATP做对照，及没有加酶的，也有很明显的颜色反应。是不是ATP很不稳定，已经水解成磷酸盐了？我这个是国庆前配得溶剂，在家过了个国庆才回来做得实验。哪位高人给指点下啊，感激
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1楼 2011-10-10 19:55:55
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

呵呵 你可以设计个实验看看是不是ATP在你的溶液中降解了
你那边做ATP的应该有荧光素和荧光素酶的把，做两个荧光素和荧光素酶的体系，分别添加不同时间点的ATP 检测荧光值的变化 没有变化说明不是ATP水解的问题。

祝好运
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可以用QQ找我……
2楼2011-10-11 11:47:28
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tianhaiyan01

铁虫 (小有名气)
新称量配置的ATP溶液都可以检测出磷酸盐，这个实验你做过么？我感觉酶非常容易失活。同天都有变化。有什么注意事项？可以指点下么？
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3楼2011-10-12 09:26:24
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tianhaiyan01

铁虫 (小有名气)
NaK ATP 酶配成了水溶液，在-20度的冰箱里保存，多上时间以内不会失活？
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4楼2011-10-18 17:31:05
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2011418003

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2362411楼: Originally posted by tianhaiyan01 at 2011-10-10 19:55:55
筛药物活性，测药物对NaK ATP 酶的抑制作用，买了sigma 的试剂，用了比色法。原理是检测ATP释放的磷酸盐的含量。我用空白的ATP做对照，及没有加酶的，也有很明显的颜色反应。是不是ATP很不稳定，已经水解成磷酸盐了 ...

想问一下，你使用什么比色的，那种手段测的呢？荧光吗？
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加油……
5楼2012-10-22 12:43:46
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人生初见

木虫 (小有名气)
请问楼主最后测出来了吗？我也在做类似的ATP酶活测定，请教经验！
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6楼2013-11-02 08:11:53
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tianhaiyan01

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 人生初见 at 2013-11-02 08:11:53
请问楼主最后测出来了吗？我也在做类似的ATP酶活测定，请教经验！

测出来了，可以交流
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7楼2013-11-05 09:35:59
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jhw622

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tianhaiyan01 at 2013-11-05 09:35:59
测出来了，可以交流...

楼主好，我也在要做一个ATP的酶活测定实验。求点经验啊 空白对照ATP颜色反应你最后是怎么处理的另外你的ATP是溶解在什么buffer里面啊？给个sigma货号吧
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8楼2014-06-24 15:26:59
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kuangliuqing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tianhaiyan01 at 2013-11-05 09:35:59
测出来了，可以交流...

你好！我也遇到这样的问题，请问你最后是怎么解决的？
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9楼2014-11-11 15:32:49
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