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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 用BamHI和HindIII双酶切pet-28a质粒,可是什么条带都没有事怎么回事!
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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 用BamHI和HindIII双酶切pet-28a质粒,可是什么条带都没有事怎么回事! 已有4人参与

用BamHI和HindIII双酶切pet-28a质粒,4个小时,用的是通用buffer K,可是电泳什么条带都没有,要是没切开的话是不是也应该有三条带啊?其他maker和未酶切的pet-28a质粒都跑出来了,单酶切同时跑电泳也是什么都没有!还请前辈指教!已经做了两回了!请问需要分别切吗?
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1楼 2014-10-30 16:42:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

姣妹崽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-31 23:13:44
我觉得首先确定你的体系没出错，然后考虑你的酶有没有过期失活什么的？
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2楼2014-10-31 14:23:11
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-02 22:35:47
对照和酶切的低物是同一管东西吗？如果不是，先检测一下新提的质粒，有了再说！如若是，表明质粒没有问题。就很可能是酶或者缓冲液出了问题，降解了质粒…楼主下次把酶切时间换成两个小时，把胶孔做到胶中间跑跑试试！如果能双切的话，尽量一次完成，不单独切！

[ 发自小木虫客户端 ]
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
7楼2014-11-01 12:31:09
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普通回帖

well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 姣妹崽 at 2014-10-31 14:23:11
我觉得首先确定你的体系没出错，然后考虑你的酶有没有过期失活什么的？

酶是没问题的,切别的载体时成功的,体系是用25微升的,载体时15微升,其他酶是各1微升.buffer是2.5微升.
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3楼2014-10-31 14:46:20
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圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-31 23:13:49
这个是没有道理的，你的对照是同一个提取的质粒吗？你说质粒不酶切就可以跑出条带，酶切就跑不出来？？？？操作严格或者规范一点，祝你好运。
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4楼2014-10-31 15:27:12
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jinshengfang

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-31 23:13:56
单酶切都没有了，说明两个酶都把质粒切掉了，那分步切就没有意义。我觉得可能是酶或者缓冲液被污染了
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生物催化
5楼2014-10-31 16:07:48
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 圆yy at 2014-10-31 15:27:12
这个是没有道理的，你的对照是同一个提取的质粒吗？你说质粒不酶切就可以跑出条带，酶切就跑不出来？？？？操作严格或者规范一点，祝你好运。

我觉得有可能是提取的质粒出现了问题,也有可能是在酶切过程中质粒降解了,但是我觉得可能不大,愁死了!
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6楼2014-10-31 16:21:32
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yuan爱

新虫 (初入文坛)
你好，请问你的酶切体系是什么
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8楼2016-03-07 12:52:28
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dushangyun

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by well_想太多 at 2014-10-31 14:46:20
酶是没问题的,切别的载体时成功的,体系是用25微升的,载体时15微升,其他酶是各1微升.buffer是2.5微升....

我也是遇到了同样的问题，至今都没有解决，酶切四个小时什么都没有，连质粒都没有了
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经不住逝水流年，逃不过此间少年
9楼2016-05-24 19:24:18
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zqx176

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2017-08-26 16:55:28
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