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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】部分酶切怎么做 已有3人参与

加了酶切位点后,都测完序了,才发现,目的基因本身就带着同样的酶切位点,只能通过部分酶切来弥补了,但是不知道怎么做,部分酶切的体系或者操作是怎样的呢?请各位朋友指点!
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-06-02 18:36:18
体系和正常酶切没什么区别

酶少加一点(根据加入酶切体系的DNA量决定内切酶用量,1~2U Enz/ug DNA),缩短酶切时间

如果样品足够多的话,最好是先摸索一下,做几管平行样,酶切开始后每20min取出一管终止酶切,最后一起跑电泳,选择部分酶切条带比较满意的作为正式酶切的条件
2楼2010-06-02 17:53:00
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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-02 17:53:00:
体系和正常酶切没什么区别

酶少加一点(根据加入酶切体系的DNA量决定内切酶用量,1~2U Enz/ug DNA),缩短酶切时间

如果样品足够多的话,最好是先摸索一下,做几管平行样,酶切开始后每20min取出一管终止酶 ...

好!谢谢你
3楼2010-06-02 18:24:08
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-06-02 22:34:01
我的做法是,切10min后,取一点电泳,同时将酶切的体系放4℃,电泳检测结果没有达到酶切要求,就再放回水浴锅去切,切5min再做同样的事情。。。直到达到目的马上跑胶回收
4楼2010-06-02 20:59:01
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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

谢谢你!
5楼2010-06-03 12:42:04
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