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树苗儿

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pennchem

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-12-12 12:24:48
有以下几种可能
(1)蛋白表达没有活性
(2)纯化过程失活
(3)透析过程失活
(4)冻干过程失活
PS,你的冻干参数是什么?冻干前做过酶活实验吗?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-12-11 22:49:08
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-12 12:25:00
我去,为什么要冻干啊 直接冻起来分装就好了
还有你纯化的时候没有加蛋白酶抑制剂吧?反正我纯化的时候连PMSF都不敢加。。。

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-12-12 04:54:51
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树苗儿

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4楼2014-12-16 21:46:46
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树苗儿

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5楼2014-12-16 21:48:22
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

引用回帖:
5楼: Originally posted by 树苗儿 at 2014-12-16 01:48:22
没有加蛋白酶抑制剂的,我重新纯化了一批,是有活性的,应该是冻干的问题,请问你做过TEV酶吗?我有一个融合蛋白切开了,一个融合蛋白切不开...

切不开是说完全切不开,还是说只有20-30%切开了?
完全切不开的话你最好检查一下蛋白序列,还有缓冲液pH,里面不要有SDS之类的能让蛋白失活的
要是能切开一点你就使劲加大用量吧,用0.2mg/ml,有的时候效率就是不太好

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
6楼2014-12-17 00:50:21
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树苗儿

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7楼2014-12-17 10:03:37
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