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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序出现套峰
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s1g2k3

铁虫 (小有名气)

[求助] 测序出现套峰 已有2人参与

测得正反向，正向结果套峰严重，一点都看不了，反向测序能读出来350bp的长度。问技术支持，说是模板有非同源的基因，但是如果说有非同源的基因，为什么反向能读出来350bp呢，测了几个都是这种情况，不明白为什么。
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知识总是多的学不完，但是真的艺不压身。
1楼 2014-12-01 15:10:49
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yuehedou

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-01 19:27:21
模板有非同源基因与测序反向能读出来有什么关系？
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每天都为自己的无知而羞耻！
2楼2014-12-01 15:18:13
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s1g2k3

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuehedou at 2014-12-01 15:18:13
模板有非同源基因与测序反向能读出来有什么关系？

有非同源的模板的话反向也应该读不出来呀，用的是t载体，通用引物测序的。
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知识总是多的学不完，但是真的艺不压身。
3楼2014-12-01 15:28:03
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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
s1g2k3: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-12-01 15:57:54
反向读出的350bp，如果是你的目的条带，那么不排除测序过程中的问题。
如果不是你要的东西，很可能是你质粒的问题
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4楼2014-12-01 15:47:11
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s1g2k3

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangbin1 at 2014-12-01 15:47:11
反向读出的350bp，如果是你的目的条带，那么不排除测序过程中的问题。
如果不是你要的东西，很可能是你质粒的问题

读出来的是我的目的序列，所以这就很奇怪到底是什么原因，如果是我的原因我就改进就行了，这次是第一次用这个公司~跟之前不同的是我的模板量比之前少了些，其他都是一样的。
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知识总是多的学不完，但是真的艺不压身。
5楼2014-12-01 15:57:47
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yangbin1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
s1g2k3: 金币+2 2014-12-01 20:34:30
引用回帖:
5楼: Originally posted by s1g2k3 at 2014-12-01 15:57:47
读出来的是我的目的序列，所以这就很奇怪到底是什么原因，如果是我的原因我就改进就行了，这次是第一次用这个公司~跟之前不同的是我的模板量比之前少了些，其他都是一样的。...

我估计不是你的问题。应该是测序公司的事
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6楼2014-12-01 16:07:59
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yzj926521

新虫 (小有名气)
前后各能测出350bp的话，中间出现套峰，有序列出现碱基插入或缺失的可能
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7楼2014-12-02 08:39:29
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xielifenxie

银虫 (小有名气)
我的情况和LZ是一样一样的，很是困惑! 不过我的是一般PCR扩增的，现在也准备试试克隆之后再测序的结果
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8楼2014-12-03 10:51:13
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