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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于载体构建中如何确定目的基因
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zb61788260

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于载体构建中如何确定目的基因 已有2人参与

我想将核桃中的一种蛋白构建载体进行原核表达，但是这种蛋白的氨基酸序列直接在NCBI中找到显示的是2S albumin seed storage protein precursor mRNA, partial cds，它是之前某个学者在发表的一篇文献中鉴定出来的，但是显示的是“ precursor mRNA, partial cds”，我想问我可以直接拿这段核苷酸序列来对其构建载体进行蛋白表达吗？表达出的蛋白能够跟天然的蛋白序列保持一致吗？还是需要我自己构建它的cDNA文库然后筛选出序列呢？菜鸟一只，希望大神们解惑！感激不尽...
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1楼 2014-11-24 16:44:55
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果文库没有cDNA序列，得自己RACE测序。
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慎思明辨博学笃行
2楼2014-11-24 20:04:15
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zb61788260

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoliwang at 2014-11-24 20:04:15
如果文库没有cDNA序列，得自己RACE测序。

我没明白你说的什么意思啊？可以具体详细一些吗？什么叫文库没有cDNA序列？
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3楼2014-11-25 16:26:29
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
dllchina: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-25 23:52:30
如果只查到precusor mRNA, partial cds，没查到成熟mRNA序列，就无法推出cDNA(互补DNA)。你只能自己克隆基因了。
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慎思明辨博学笃行
4楼2014-11-25 17:09:19
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zb61788260

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by guoliwang at 2014-11-25 17:09:19
如果只查到precusor mRNA, partial cds，没查到成熟mRNA序列，就无法推出cDNA(互补DNA)。你只能自己克隆基因了。

那自己克隆基因的方法就是您说的使用RACE测序吗？我做食品的，对分子生物学方面不怎么懂。我看的有些文献里说的是构建核桃种子的cDNA文库再筛选我需要的目的基因，跟您说的方法不一样吧？你能稍微说具体些“自己克隆基因”所用的技术及步骤之类的吗？我想了解学习一下，谢谢！
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5楼2014-11-26 17:12:22
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zb61788260 at 2014-11-26 17:12:22
那自己克隆基因的方法就是您说的使用RACE测序吗？我做食品的，对分子生物学方面不怎么懂。我看的有些文献里说的是构建核桃种子的cDNA文库再筛选我需要的目的基因，跟您说的方法不一样吧？你能稍微说具体些“自己克 ...

先建文库再筛选是一种方法。
RACE是另外一种方法。你的领域我不清楚。抱歉
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慎思明辨博学笃行
6楼2014-11-26 17:20:17
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aabbwestone

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

通过RACE可以得到你要的目的蛋白的mRNA完整序列，再找到cDNA，就可以直接构建表达载体了
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rightbackinthewater
7楼2014-11-28 20:20:00
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dllchina: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-30 00:11:48
不用race，先把orf框克隆出来，表达一下看看

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2014-11-29 20:41:12
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