应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于载体构建中如何确定目的基因
81/1返回列表
查看: 1414  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zb61788260

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于载体构建中如何确定目的基因 已有2人参与

我想将核桃中的一种蛋白构建载体进行原核表达，但是这种蛋白的氨基酸序列直接在NCBI中找到显示的是2S albumin seed storage protein precursor mRNA, partial cds，它是之前某个学者在发表的一篇文献中鉴定出来的，但是显示的是“ precursor mRNA, partial cds”，我想问我可以直接拿这段核苷酸序列来对其构建载体进行蛋白表达吗？表达出的蛋白能够跟天然的蛋白序列保持一致吗？还是需要我自己构建它的cDNA文库然后筛选出序列呢？菜鸟一只，希望大神们解惑！感激不尽...
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-24 16:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果文库没有cDNA序列，得自己RACE测序。
赞一下 回复此楼
慎思明辨博学笃行
2楼2014-11-24 20:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zb61788260

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoliwang at 2014-11-24 20:04:15
如果文库没有cDNA序列，得自己RACE测序。

我没明白你说的什么意思啊？可以具体详细一些吗？什么叫文库没有cDNA序列？
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-25 16:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
dllchina: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-25 23:52:30
如果只查到precusor mRNA, partial cds，没查到成熟mRNA序列，就无法推出cDNA(互补DNA)。你只能自己克隆基因了。
赞一下 回复此楼
慎思明辨博学笃行
4楼2014-11-25 17:09:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zb61788260

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by guoliwang at 2014-11-25 17:09:19
如果只查到precusor mRNA, partial cds，没查到成熟mRNA序列，就无法推出cDNA(互补DNA)。你只能自己克隆基因了。

那自己克隆基因的方法就是您说的使用RACE测序吗？我做食品的，对分子生物学方面不怎么懂。我看的有些文献里说的是构建核桃种子的cDNA文库再筛选我需要的目的基因，跟您说的方法不一样吧？你能稍微说具体些“自己克隆基因”所用的技术及步骤之类的吗？我想了解学习一下，谢谢！
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-26 17:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoliwang

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zb61788260 at 2014-11-26 17:12:22
那自己克隆基因的方法就是您说的使用RACE测序吗？我做食品的，对分子生物学方面不怎么懂。我看的有些文献里说的是构建核桃种子的cDNA文库再筛选我需要的目的基因，跟您说的方法不一样吧？你能稍微说具体些“自己克 ...

先建文库再筛选是一种方法。
RACE是另外一种方法。你的领域我不清楚。抱歉
赞一下 回复此楼
慎思明辨博学笃行
6楼2014-11-26 17:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aabbwestone

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

通过RACE可以得到你要的目的蛋白的mRNA完整序列，再找到cDNA，就可以直接构建表达载体了
赞一下 回复此楼
rightbackinthewater
7楼2014-11-28 20:20:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dllchina: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-30 00:11:48
不用race，先把orf框克隆出来，表达一下看看

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-29 20:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zb61788260 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭