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踏雪无极限

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR相关问题,新手遇到一些问题,比较纠结,前来求教?已有2人参与

最近刚刚开始做PCR,遇到一个问题,同一个基因,取虫子的六个不同组织的cDNA模板,设计了三对不同的引物,其中两对扩增结果是一样的,见图1,2,另一对引物比较特别,六个组织中基因表达量一点差异都没有,见图3(图1,2,3都是30个循环下,退火温度50度),对于第三对引物我又试了降低循环数(25c,27c),提高退火温度(55,63度),还是没差异,
所以觉得很奇怪,即便actin也达不到如此一致,而且第三对引物扩出来的就是目的片段,做其它实验时顺便回收测了序,没有问题,
那么三对引物不一样,到底以哪个为准呢?

RT-PCR相关问题,新手遇到一些问题,比较纠结,前来求教?
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RT-PCR相关问题,新手遇到一些问题,比较纠结,前来求教?-1
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RT-PCR相关问题,新手遇到一些问题,比较纠结,前来求教?-2
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