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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR相关问题，新手遇到一些问题，比较纠结，前来求教？
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踏雪无极限

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR相关问题，新手遇到一些问题，比较纠结，前来求教？ 已有2人参与

最近刚刚开始做PCR,遇到一个问题，同一个基因，取虫子的六个不同组织的cDNA模板，设计了三对不同的引物，其中两对扩增结果是一样的，见图1,2,另一对引物比较特别，六个组织中基因表达量一点差异都没有，见图3（图1,2,3都是30个循环下，退火温度50度），对于第三对引物我又试了降低循环数（25c,27c），提高退火温度(55,63度)，还是没差异，
所以觉得很奇怪，即便actin也达不到如此一致，而且第三对引物扩出来的就是目的片段，做其它实验时顺便回收测了序，没有问题，
那么三对引物不一样，到底以哪个为准呢？

RT-PCR相关问题，新手遇到一些问题，比较纠结，前来求教？
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RT-PCR相关问题，新手遇到一些问题，比较纠结，前来求教？-1
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RT-PCR相关问题，新手遇到一些问题，比较纠结，前来求教？-2
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1楼 2014-11-24 13:50:47
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ixiaoye2012

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
踏雪无极限(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:07:25
为何不做RT-PCR，你这个只能看到最后的结果，看不到过程是怎么样的。
赞一下 回复此楼
就算大雨将整座城市颠倒，我也会给你拥抱
2楼2014-11-24 15:16:55
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陆朝军

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的目的基因是单拷贝吗？也许第三对引物有扩到其他的拷贝上！
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-26 21:47:11
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