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wolf308

新虫 (初入文坛)

[求助] 用cDNA做PCR之后的电泳图,求指点. 已有4人参与

各高手前辈,请教电泳分析的问题,我提取了总RNA,反转录之后,针对一个基因,设计了两对引物,退回温度设在了50度,35个循环,电泳图如附件。
    Marker左侧是引物1,扩增的片段为100左右,也在Marker的附近,说明大小合适,但是目的条带上面有拖尾现象,是不是非特异性扩增啊?
    Marker右侧是引物2,引物设计时的片段大小也在300bp左右,也能和Marker对应上,说明片段大小正确。问题是这两对引物是同时扩增的,亮度都不高,会是什么原因呢?如果去测序的话,会有好的结果吗?
    我自己认为引物2比引物1要好一点,对吗?

用cDNA做PCR之后的电泳图,求指点.
PCR.jpg.jpg.jpg.jpg
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zhaokexue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wolf308(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:09:17
引用回帖:
6楼: Originally posted by wolf308 at 2014-11-23 13:58:48
多谢了,金币奉上!我拿PCR产物去测序呢还是要回收胶里面的条带,我个人认为,这个结果,特异性还可以,是不是可以直接拿PCR产物去测序啊?
...

你可以扣胶,用纯化试剂盒把目标片段送给测序公司,我都是这么做的,好处是纯化后目标产物不容易降解。如果你说的那样,不知道你经常用的公司是不是可以接收凝胶样品。最好纯化后再去测序…

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-11-23 14:41:17
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wolf308(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 13:21:05
右侧引物2测序应该是好点。但是有点暗!不过没事!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-11-23 10:28:24
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wolf308

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-11-23 10:28:24
右侧引物2测序应该是好点。但是有点暗!不过没事!

暗的原因可能有哪些啊?会是模板量不够吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-23 13:14:40
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zhaokexue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wolf308(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:09:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolf308 at 2014-11-23 13:14:40
暗的原因可能有哪些啊?会是模板量不够吗?
...

你这个已经很好了,完全可以去测序,分子量小,嵌入的EB少,显色自然要暗一些,还有就是和点样量有关,电泳时多上点样亮度也会增加

[ 发自小木虫客户端 ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2014-11-23 13:44:35
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