应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用cDNA做PCR之后的电泳图，求指点.
51/1返回列表
查看: 2504  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wolf308

新虫 (初入文坛)

[求助] 用cDNA做PCR之后的电泳图，求指点. 已有4人参与

各高手前辈，请教电泳分析的问题，我提取了总RNA，反转录之后，针对一个基因，设计了两对引物，退回温度设在了50度，35个循环，电泳图如附件。
    Marker左侧是引物1，扩增的片段为100左右，也在Marker的附近，说明大小合适，但是目的条带上面有拖尾现象，是不是非特异性扩增啊？
    Marker右侧是引物2，引物设计时的片段大小也在300bp左右，也能和Marker对应上，说明片段大小正确。问题是这两对引物是同时扩增的，亮度都不高，会是什么原因呢？如果去测序的话，会有好的结果吗？
    我自己认为引物2比引物1要好一点，对吗？

用cDNA做PCR之后的电泳图，求指点.
PCR.jpg.jpg.jpg.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-23 00:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaokexue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wolf308(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:09:17
引用回帖:
6楼: Originally posted by wolf308 at 2014-11-23 13:58:48
多谢了，金币奉上！我拿PCR产物去测序呢还是要回收胶里面的条带，我个人认为，这个结果，特异性还可以，是不是可以直接拿PCR产物去测序啊？
...

你可以扣胶，用纯化试剂盒把目标片段送给测序公司，我都是这么做的，好处是纯化后目标产物不容易降解。如果你说的那样，不知道你经常用的公司是不是可以接收凝胶样品。最好纯化后再去测序…

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-11-23 14:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wolf308(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 13:21:05
右侧引物2测序应该是好点。但是有点暗！不过没事！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wolf308
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-11-23 10:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolf308

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-11-23 10:28:24
右侧引物2测序应该是好点。但是有点暗！不过没事！

暗的原因可能有哪些啊？会是模板量不够吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-23 13:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaokexue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wolf308(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:09:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolf308 at 2014-11-23 13:14:40
暗的原因可能有哪些啊？会是模板量不够吗？
...

你这个已经很好了，完全可以去测序，分子量小，嵌入的EB少，显色自然要暗一些，还有就是和点样量有关，电泳时多上点样亮度也会增加

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wolf308
4楼2014-11-23 13:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +16 Lanmanbaby 2026-08-09 26/1300 2026-08-11 17:16 by 天神眷顾
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:15 by CLKTSgjM0Uqj
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-11 16:57 by Ai19911123
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 帮忙看看fileCode +6 wwncly 2026-08-10 12/600 2026-08-11 13:01 by wwncly
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭