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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wolf308

新虫 (初入文坛)

[求助] 用cDNA做PCR之后的电泳图,求指点. 已有4人参与

各高手前辈,请教电泳分析的问题,我提取了总RNA,反转录之后,针对一个基因,设计了两对引物,退回温度设在了50度,35个循环,电泳图如附件。
    Marker左侧是引物1,扩增的片段为100左右,也在Marker的附近,说明大小合适,但是目的条带上面有拖尾现象,是不是非特异性扩增啊?
    Marker右侧是引物2,引物设计时的片段大小也在300bp左右,也能和Marker对应上,说明片段大小正确。问题是这两对引物是同时扩增的,亮度都不高,会是什么原因呢?如果去测序的话,会有好的结果吗?
    我自己认为引物2比引物1要好一点,对吗?

用cDNA做PCR之后的电泳图,求指点.
PCR.jpg.jpg.jpg.jpg
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zhaokexue

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wolf308(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:09:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolf308 at 2014-11-23 13:14:40
暗的原因可能有哪些啊?会是模板量不够吗?
...

你这个已经很好了,完全可以去测序,分子量小,嵌入的EB少,显色自然要暗一些,还有就是和点样量有关,电泳时多上点样亮度也会增加

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2014-11-23 13:44:35
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wolf308(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 13:21:05
右侧引物2测序应该是好点。但是有点暗!不过没事!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-11-23 10:28:24
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wolf308

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-11-23 10:28:24
右侧引物2测序应该是好点。但是有点暗!不过没事!

暗的原因可能有哪些啊?会是模板量不够吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-11-23 13:14:40
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wolf308

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaokexue at 2014-11-23 13:44:35
你这个已经很好了,完全可以去测序,分子量小,嵌入的EB少,显色自然要暗一些,还有就是和点样量有关,电泳时多上点样亮度也会增加
...

多谢你们的指点,我只有这么多金币,感谢你们!

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5楼2014-11-23 13:55:20
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