24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2357  |  回复: 16

liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 关于凝胶回收浓度以及质粒抽提的浓度问题 已有5人参与

本人刚刚研一,做微生物的基因敲除,现在处在构建电转化的载体阶段,想请教两个问题:
1、pcr之后条带很亮而且做了好几管,但是回收的浓度总是上不来,一直在80到100ng/μL左右,因为后期需要酶切,这个浓度稍微有些低,用的是天根的试剂盒,是操作的问题吗?有没有什么改进的方法,有经验的师兄师姐们给点建议
2、质粒抽提时,浓度时高时低,养菌的时间一般也都差不多,这是怎么回事呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wxlzl0915

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果后期需做酶切,建议用水代替elution buffer,30~50uL,加30ul即可
莫愁前路无知己,天下谁人不识君。
9楼2014-11-26 11:34:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuwukang(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-23 13:20:41
那个试剂盒我用过,你这样,酒精洗完干燥5min,然后加入elution buffer以后再盖盖溶解5min然后离心即可!
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-11-23 10:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-11-23 10:32:14
那个试剂盒我用过,你这样,酒精洗完干燥5min,然后加入elution buffer以后再盖盖溶解5min然后离心即可!

嗯,今天打算多干燥一会再洗,另问,洗脱用50uL可以吗?多了还是少了?
3楼2014-11-23 12:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个浓度足以你做n次连接的。继续往下看

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-11-23 12:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by myheat at 2014-11-23 12:40:47
这个浓度足以你做n次连接的。继续往下看

请问做连接时一般多少的浓度是最低限?
5楼2014-11-23 21:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


liuwukang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:02:35
引用回帖:
5楼: Originally posted by liuwukang at 2014-11-23 21:21:37
请问做连接时一般多少的浓度是最低限?...

我用过最低的有30-40都可以的

[ 发自小木虫客户端 ]
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
6楼2014-11-24 07:46:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by liuwukang at 2014-11-23 21:21:37
请问做连接时一般多少的浓度是最低限?...

总量够就行。浓度无要求,所有步骤用水代替kit里面的EB

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-11-24 08:41:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuwukang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:02:45
如果觉得胶回收浓度低的话,可以多备些样品,多切几块
8楼2014-11-24 13:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wxlzl0915 at 2014-11-26 11:34:46
如果后期需做酶切,建议用水代替elution buffer,30~50uL,加30ul即可

现在酶切效果还可以,主要考虑连接的问题,为什么用水呢?有什么区别?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2014-11-26 18:20:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuwukang 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +8 fummck 2026-05-20 9/450 2026-05-21 11:41 by maxjing
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[基金申请] 今年审到国自然15份,谈谈感受 +21 国自然国社科中 2026-05-17 22/1100 2026-05-21 09:37 by 2000zf36392
[论文投稿] 投MDPI的三个期刊都被桌拒 +3 木虫研究牲 2026-05-17 4/200 2026-05-21 08:02 by bobvan
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 12/600 2026-05-21 07:08 by maolC
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +4 光伏爱好者 2026-05-17 6/300 2026-05-21 01:37 by 17520222914
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[基金申请] 国自然评分 +3 无名者登山 2026-05-20 4/200 2026-05-20 13:29 by vito刘
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 8/400 2026-05-20 09:32 by xtlilibin
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人(2026.09) +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
信息提示
请填处理意见