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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 关于凝胶回收浓度以及质粒抽提的浓度问题
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知足1常乐

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by liuwukang at 2014-11-26 18:20:40
现在酶切效果还可以，主要考虑连接的问题，为什么用水呢？有什么区别？
...

EB的成分  对酶有影响吧！！盐离子之类的 ，dd水没问题的
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一切随缘，不抛弃，不放弃。愿你们快乐，幸福。做好最好最坏的准备！
11楼2014-11-26 18:54:30
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 知足1常乐 at 2014-11-26 18:54:30
EB的成分  对酶有影响吧！！盐离子之类的 ，dd水没问题的...

双蒸水就可以么？不需要depc水嘛？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-11-26 23:57:48
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wxlzl0915

金虫 (著名写手)
★
liuwukang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 19:57:36
引用回帖:
10楼: Originally posted by liuwukang at 2014-11-26 18:20:40
现在酶切效果还可以，主要考虑连接的问题，为什么用水呢？有什么区别？
...

如果用ddH2O代替elution buffe，在后期做酶切效果会比elution buffe要好，会减少对酶切效果的影响，但是水中保存时间会比elution buffe短，如果长期保存或者不做酶切建议还是用elution buffe。酶切胶回收后立即连接，如果1~2h连接效果不理想，可以过夜连接的
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莫愁前路无知己，天下谁人不识君。
13楼2014-11-27 09:29:37
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知足1常乐

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by liuwukang at 2014-11-26 23:57:48
双蒸水就可以么？不需要depc水嘛？
...

是的
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一切随缘，不抛弃，不放弃。愿你们快乐，幸福。做好最好最坏的准备！
14楼2014-11-27 09:40:41
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
liuwukang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 19:57:46
这个浓度做后续的连接应该足够了，楼主有没有测试过纯度在？在1.8-2.0之间。如果还嫌小，就多做几管PCR，回收到一管中就可以了。最后一步洗脱时用PH7—8的水而不用Eloution Buffer （EB溶液中有EDTA会对后续反应有影响力）
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15楼2014-11-27 13:19:51
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2014-11-27 13:19:51
这个浓度做后续的连接应该足够了，楼主有没有测试过纯度在？在1.8-2.0之间。如果还嫌小，就多做几管PCR，回收到一管中就可以了。最后一步洗脱时用PH7—8的水而不用Eloution Buffer （EB溶液中有EDTA会对后续反应有影 ...

用nanodrop测的浓度，纯度一般在1.9左右

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-11-27 19:45:26
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Alex-kunkun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wxlzl0915 at 2014-11-26 11:34:46
如果后期需做酶切，建议用水代替elution buffer，30~50uL，加30ul即可

用水的话 需要调节水的PH么？水有要求么？DD水还是无菌水？
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17楼2016-07-25 13:15:59
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