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liuwukang

新虫 (小有名气)

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[求助] 关于凝胶回收浓度以及质粒抽提的浓度问题已有5人参与

本人刚刚研一，做微生物的基因敲除，现在处在构建电转化的载体阶段，想请教两个问题：
1、pcr之后条带很亮而且做了好几管，但是回收的浓度总是上不来，一直在80到100ng/μL左右，因为后期需要酶切，这个浓度稍微有些低，用的是天根的试剂盒，是操作的问题吗？有没有什么改进的方法，有经验的师兄师姐们给点建议
2、质粒抽提时，浓度时高时低，养菌的时间一般也都差不多，这是怎么回事呢？

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1楼 2014-11-22 22:42:00

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wxlzl0915

金虫 (著名写手)

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★
liuwukang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 19:57:36

引用回帖:

10楼: Originally posted by liuwukang at 2014-11-26 18:20:40
现在酶切效果还可以，主要考虑连接的问题，为什么用水呢？有什么区别？
...

如果用ddH2O代替elution buffe，在后期做酶切效果会比elution buffe要好，会减少对酶切效果的影响，但是水中保存时间会比elution buffe短，如果长期保存或者不做酶切建议还是用elution buffe。酶切胶回收后立即连接，如果1~2h连接效果不理想，可以过夜连接的