应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » T-RFLP中回收及酶切相关问题
51/1返回列表
查看: 2419  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

张永婧1991

新虫 (初入文坛)

[求助] T-RFLP中回收及酶切相关问题 已有4人参与

我做的是肠道微生物多态性，用T-RFLP技术，已经提取出基因组总DNA，PCR体系为25ul,用通用引物扩增出目的片段，1500bp左右，条带较亮且单一，无引物二聚体等其他杂物，然后用2%的琼脂糖凝胶跑电泳做切胶回收，用的是Axygen的凝胶回收试剂盒，每次每孔回收上样量为10ul，然后将3个孔的条带切胶回收，回收后的DNA浓度却只有10ng/ul左右，用过天根的试剂盒也是基本上差不多。然后看到论坛上有人说单一条带可以不同切胶回收直接就酶切就可以，于是按照酶切体系进行酶切，PCR产物用5ul,酶用1ul。结果还是没有条带，正常情况如果不酶切的话，那条目的条带应该是存在的吧，但是酶切之后没有，说明是切开了？可是什么小条带都看不见。。还有就是如果直接PCR产物酶切的话，这个产物还要做什么预处理吗？求求各位大神，这些都快做了一个月了，还是没有结果。。。快哭了呀！以前没接触过分子，望大神指导！图1是回收后做酶切的条带，就是这种情况。

T-RFLP中回收及酶切相关问题
图1.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Alphard 02

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-25 16:28:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不用loading buffer能跑出东西来？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(2人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
9楼2014-10-28 21:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张永婧1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:46:51
实在不行可以试试PCR过柱纯化试剂盒，不过用过柱纯化会在0~50bp之间有个很高的杂峰，使用数据时就别用小于50bp的峰了。
PCR产物需要纯化后才能做酶切。
我上学时还是经常做这个的。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-25 20:07:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张永婧1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peterrjp at 2014-10-25 20:07:26
实在不行可以试试PCR过柱纯化试剂盒，不过用过柱纯化会在0~50bp之间有个很高的杂峰，使用数据时就别用小于50bp的峰了。
PCR产物需要纯化后才能做酶切。
我上学时还是经常做这个的。

纯化应该比切胶回收好很多吧？现在情况就是切胶收不回来，不切直接酶切还是没条带。。
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-26 10:38:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 张永婧1991 at 2014-10-26 10:38:43
纯化应该比切胶回收好很多吧？现在情况就是切胶收不回来，不切直接酶切还是没条带。。...

切胶回收效率低，过柱纯化也还凑合能用，总比你不纯化来得好。不纯化，杂质会影响酶切
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-26 10:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂（0805） +6 烟汐忆海 2026-03-16 15/750 2026-03-18 21:12 by Gaodh_82
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +8 llllkkkhh 2026-03-18 8/400 2026-03-18 21:01 by Catalysis25
[考研] 271材料工程求调剂 +4 .6lL 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:05 by 楤哥
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 314求调剂 +8 无懈可击的巨人 2026-03-12 8/400 2026-03-18 14:50 by haxia
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 268求调剂 +7 好运连绵不绝 2026-03-12 8/400 2026-03-17 20:28 by xilongliang
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭