| 查看: 2998 | 回复: 17 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
T-RFLP中回收及酶切相关问题 已有4人参与
|
|||
我做的是肠道微生物多态性，用T-RFLP技术，已经提取出基因组总DNA，PCR体系为25ul,用通用引物扩增出目的片段，1500bp左右，条带较亮且单一，无引物二聚体等其他杂物，然后用2%的琼脂糖凝胶跑电泳做切胶回收，用的是Axygen的凝胶回收试剂盒，每次每孔回收上样量为10ul，然后将3个孔的条带切胶回收，回收后的DNA浓度却只有10ng/ul左右，用过天根的试剂盒也是基本上差不多。然后看到论坛上有人说单一条带可以不同切胶回收直接就酶切就可以，于是按照酶切体系进行酶切，PCR产物用5ul,酶用1ul。结果还是没有条带，正常情况如果不酶切的话，那条目的条带应该是存在的吧，但是酶切之后没有，说明是切开了？可是什么小条带都看不见。。还有就是如果直接PCR产物酶切的话，这个产物还要做什么预处理吗？求求各位大神，这些都快做了一个月了，还是没有结果。。。快哭了呀！以前没接触过分子，望大神指导！图1是回收后做酶切的条带，就是这种情况。 图1.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 Alphard 02 |
» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有130人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR得到单一条带后能不能不回收，直接酶切
已经有4人回复
- 关于双酶切的酶的失活问题
已经有6人回复
- 基因组酶切问题！急！
已经有7人回复
- 怎么预期酶切产物的大小？
已经有8人回复
- 用T-RFLP的大侠
已经有8人回复
- PBI121载体酶切后回收
已经有28人回复
- 急求酶切，回收及连接详细操作步骤
已经有10人回复
- T载体与目的片段大小一致时,怎么酶切回收啊
已经有10人回复
- 关于双酶切后回收的问题
已经有12人回复
- t载体酶切问题
已经有15人回复
- 双酶切后液体回收
已经有3人回复
- 双酶切后切胶回收
已经有34人回复
- 提取质粒之后又三条带, 需要切胶回收未开环DNA再进行酶切吗?
已经有10人回复
- 关于SphI酶的酶切问题
已经有7人回复
- T-RFLP检测峰值太少
已经有7人回复
- 双酶切后目的条带很淡，回收不到
已经有15人回复
- 分步酶切 回收不到片段
已经有4人回复
- 酶切之后跑回收胶总是没有条带是怎么回事呢
已经有9人回复
- 请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？
已经有15人回复
- PCR产物凝胶回收、酶切等问题请教
已经有7人回复
- 纯化后酶切产物的保存
已经有10人回复
- 129bp小片段从pGEM-T上酶切回收的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】T-RFLP酶切产物存放时间问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】DNA酶切回收跑胶怎么有小条带啊？[
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教一下大家的酶切时间是多久
已经有8人回复
3楼2014-10-26 10:38:43
peterrjp
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 65 (初中生)
- 金币: 24489.1
- 红花: 16
- 帖子: 2608
- 在线: 67小时
- 虫号: 395640
- 注册: 2007-06-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
2楼2014-10-25 20:07:26
peterrjp
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 65 (初中生)
- 金币: 24489.1
- 红花: 16
- 帖子: 2608
- 在线: 67小时
- 虫号: 395640
- 注册: 2007-06-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
4楼2014-10-26 10:48:46
5楼2014-10-26 18:30:34
10