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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用T-RFLP的大侠
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tllcu

木虫 (小有名气)

[交流] 用T-RFLP的大侠 已有2人参与

目前正在用T-RFLP做土壤细菌群落多样性，PCR产物还行，但是酶切却怎么也没产物，我是用2%的琼脂糖凝胶跑的酶切产物有没有条带，用的1倍的TBE缓冲液，酶切的各个时间点也都取样检测了（1-8个小时，每个小时取一个样品），都没有条带，不知道什么原因，请各位大侠指教！
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1楼 2013-09-25 11:11:44
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672234993

金虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 09:22:54
琼脂糖电泳的分辨率不够，用聚丙烯酰胺胶电泳或者毛细管电泳就可以看到了。
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我会回火星去的，别催我。。。。。。
2楼2013-09-25 20:21:10
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tllcu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 672234993 at 2013-09-25 20:21:10
琼脂糖电泳的分辨率不够，用聚丙烯酰胺胶电泳或者毛细管电泳就可以看到了。

聚丙烯酰胺得用多大浓度的呢，你说的毛细管电泳咱们在实验室就自己可以做么，我不是很了解，请多多指教！
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3楼2013-09-25 20:34:42
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xiangchou812

木虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 09:23:04
都没有条带是什么意思？如果一条带都没有，那可能是在酶切的过程中你的PCR产物被降解了吧。
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4楼2013-09-26 09:13:00
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672234993

金虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by tllcu at 2013-09-25 20:34:42
聚丙烯酰胺得用多大浓度的呢，你说的毛细管电泳咱们在实验室就自己可以做么，我不是很了解，请多多指教！...

一般的实验室不自己做，都是送到公司里面做。而且做T-RFLP的是用的荧光标记的引物，得有识别荧光的设备才行。
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我会回火星去的，别催我。。。。。。
5楼2013-09-26 12:02:54
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tllcu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiangchou812 at 2013-09-26 09:13:00
都没有条带是什么意思？如果一条带都没有，那可能是在酶切的过程中你的PCR产物被降解了吧。

是一条条带都没有，怎么才能避免被降解呢，另外用2%的琼脂糖电泳合适么？
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6楼2013-09-26 12:30:53
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xiangchou812

木虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 20:34:35
我觉得是不是先把PCR产物纯化一下，最好是做个胶回收。然后看一下还降解不，不行的话再换一个公司或新买一些内切酶。祝顺利！
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7楼2013-09-27 09:08:48
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tllcu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiangchou812 at 2013-09-27 09:08:48
我觉得是不是先把PCR产物纯化一下，最好是做个胶回收。然后看一下还降解不，不行的话再换一个公司或新买一些内切酶。祝顺利！

谢谢！酶切之前的产物都是用试剂盒纯化的，纯化之后有条带，酶切之后什么条带也没有。
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8楼2013-09-28 17:24:39
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xiangchou812

木虫 (小有名气)
★
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这样的话，就换一种酶或者换一个公司的酶来试试。
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9楼2013-09-29 15:06:01
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