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[交流]
湿地植物根际土壤微生物总DNA提取
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最近在提取湿地土壤微生物总ＤＮＡ提取，参考文献后想用以下步骤：称取土壤 0. 25g 至 2mL Eppendorf 管中, 用1mL pH8. 0 的PBS 缓冲液洗涤2 次。加入玻璃珠0. 5g 和 1mL 裂解液( CTAB 5% , SDS 1%, EDTA0. 1mol/ L, N aCl 0. 1mo l/ L, pH 8. 0) , 轻微振荡混合均匀后旋涡振荡2min; 10000g 离心1min,吸取上清液,加入NH4Ac至浓度2.5M,混合均匀4 ℃ 保温30min; 10000 g 离心 5min, 小心吸取上清液至干净的 1. 5mL Eppendorf 管中, 加入等体积异丙醇, -20℃ 保温 30min, 10000g 离心 5min, 弃上清,用 pH8. 0 的T E 溶液200微升 溶解沉淀物; DNA溶液用葡聚糖凝胶 Sephadex G75 柱层析纯化-20℃ 保存。 希望熟知ＤＮＡ提取的大侠帮忙看一下，这个步骤中NH4Ac和异丙醇的作用是什么，据我了解到的他们都有沉淀DNA的作用，那“加入NH4Ac至浓度2.5M,混合均匀4 ℃ 保温30min; 10000 g 离心 5min, 小心吸取上清液至干净的 1. 5mL Eppendorf 管中”这一步不就把ＤＮＡ都丢弃了吗？ 求助了，求助了～～～ |
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