| 查看: 1685 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
湿地植物根际土壤微生物总DNA提取
|
|||
|
最近在提取湿地土壤微生物总ＤＮＡ提取，参考文献后想用以下步骤：称取土壤 0. 25g 至 2mL Eppendorf 管中, 用1mL pH8. 0 的PBS 缓冲液洗涤2 次。加入玻璃珠0. 5g 和 1mL 裂解液( CTAB 5% , SDS 1%, EDTA0. 1mol/ L, N aCl 0. 1mo l/ L, pH 8. 0) , 轻微振荡混合均匀后旋涡振荡2min; 10000g 离心1min,吸取上清液,加入NH4Ac至浓度2.5M,混合均匀4 ℃ 保温30min; 10000 g 离心 5min, 小心吸取上清液至干净的 1. 5mL Eppendorf 管中, 加入等体积异丙醇, -20℃ 保温 30min, 10000g 离心 5min, 弃上清,用 pH8. 0 的T E 溶液200微升 溶解沉淀物; DNA溶液用葡聚糖凝胶 Sephadex G75 柱层析纯化-20℃ 保存。 希望熟知ＤＮＡ提取的大侠帮忙看一下，这个步骤中NH4Ac和异丙醇的作用是什么，据我了解到的他们都有沉淀DNA的作用，那“加入NH4Ac至浓度2.5M,混合均匀4 ℃ 保温30min; 10000 g 离心 5min, 小心吸取上清液至干净的 1. 5mL Eppendorf 管中”这一步不就把ＤＮＡ都丢弃了吗？ 求助了，求助了～～～ |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有208人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS高盐法提取土壤微生物——求教各位批评指正
已经有7人回复
- 请大家帮我分析一下这张植物块根中提取的基因组DNA电泳图片
已经有7人回复
- 植物DNA提取
已经有15人回复
- 动植物样品的采集及DNA样品的提取(ZT)
已经有10人回复
- 植物干样DNA提取试剂盒
已经有15人回复
- 植物基因组DNA提取的一些疑问~
已经有10人回复
- 土壤微生物DNA提取
已经有4人回复
- 土壤微生物总DNA提取试剂盒选购
已经有29人回复
- 【求助/交流】提取DNA总提不出来
已经有23人回复
- 【求助/交流】提取的植物基因组DNA电泳图，疑问？？？
已经有17人回复
6楼2012-08-13 21:40:56
2楼2012-08-08 10:50:22
3楼2012-08-08 17:18:48
4楼2012-08-08 19:44:13
