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tllcu

木虫 (小有名气)

[交流] 用T-RFLP的大侠 已有2人参与

目前正在用T-RFLP做土壤细菌群落多样性,PCR产物还行,但是酶切却怎么也没产物,我是用2%的琼脂糖凝胶跑的酶切产物有没有条带,用的1倍的TBE缓冲液,酶切的各个时间点也都取样检测了(1-8个小时,每个小时取一个样品),都没有条带,不知道什么原因,请各位大侠指教!
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xiangchou812

木虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 20:34:35
我觉得是不是先把PCR产物纯化一下,最好是做个胶回收。然后看一下还降解不,不行的话再换一个公司或新买一些内切酶。祝顺利!
7楼2013-09-27 09:08:48
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672234993

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-26 09:22:54
琼脂糖电泳的分辨率不够,用聚丙烯酰胺胶电泳或者毛细管电泳就可以看到了。
我会回火星去的,别催我。。。。。。
2楼2013-09-25 20:21:10
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tllcu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 672234993 at 2013-09-25 20:21:10
琼脂糖电泳的分辨率不够,用聚丙烯酰胺胶电泳或者毛细管电泳就可以看到了。

聚丙烯酰胺得用多大浓度的呢,你说的毛细管电泳咱们在实验室就自己可以做么,我不是很了解,请多多指教!
3楼2013-09-25 20:34:42
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xiangchou812

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-26 09:23:04
都没有条带是什么意思?如果一条带都没有,那可能是在酶切的过程中你的PCR产物被降解了吧。
4楼2013-09-26 09:13:00
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