24小时热门版块排行榜    

查看: 1530  |  回复: 8

tllcu

木虫 (小有名气)

[交流] 用T-RFLP的大侠 已有2人参与

目前正在用T-RFLP做土壤细菌群落多样性,PCR产物还行,但是酶切却怎么也没产物,我是用2%的琼脂糖凝胶跑的酶切产物有没有条带,用的1倍的TBE缓冲液,酶切的各个时间点也都取样检测了(1-8个小时,每个小时取一个样品),都没有条带,不知道什么原因,请各位大侠指教!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

672234993

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-26 09:22:54
琼脂糖电泳的分辨率不够,用聚丙烯酰胺胶电泳或者毛细管电泳就可以看到了。
我会回火星去的,别催我。。。。。。
2楼2013-09-25 20:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tllcu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 672234993 at 2013-09-25 20:21:10
琼脂糖电泳的分辨率不够,用聚丙烯酰胺胶电泳或者毛细管电泳就可以看到了。

聚丙烯酰胺得用多大浓度的呢,你说的毛细管电泳咱们在实验室就自己可以做么,我不是很了解,请多多指教!
3楼2013-09-25 20:34:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-26 09:23:04
都没有条带是什么意思?如果一条带都没有,那可能是在酶切的过程中你的PCR产物被降解了吧。
4楼2013-09-26 09:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

672234993

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by tllcu at 2013-09-25 20:34:42
聚丙烯酰胺得用多大浓度的呢,你说的毛细管电泳咱们在实验室就自己可以做么,我不是很了解,请多多指教!...

一般的实验室不自己做,都是送到公司里面做。而且做T-RFLP的是用的荧光标记的引物,得有识别荧光的设备才行。
我会回火星去的,别催我。。。。。。
5楼2013-09-26 12:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tllcu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xiangchou812 at 2013-09-26 09:13:00
都没有条带是什么意思?如果一条带都没有,那可能是在酶切的过程中你的PCR产物被降解了吧。

是一条条带都没有,怎么才能避免被降解呢,另外用2%的琼脂糖电泳合适么?
6楼2013-09-26 12:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 20:34:35
我觉得是不是先把PCR产物纯化一下,最好是做个胶回收。然后看一下还降解不,不行的话再换一个公司或新买一些内切酶。祝顺利!
7楼2013-09-27 09:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tllcu

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiangchou812 at 2013-09-27 09:08:48
我觉得是不是先把PCR产物纯化一下,最好是做个胶回收。然后看一下还降解不,不行的话再换一个公司或新买一些内切酶。祝顺利!

谢谢!酶切之前的产物都是用试剂盒纯化的,纯化之后有条带,酶切之后什么条带也没有。
8楼2013-09-28 17:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这样的话,就换一种酶或者换一个公司的酶来试试。
9楼2013-09-29 15:06:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tllcu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:35 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 17:23 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-15 15:50 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:38 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:34 by VMDqgnlKimtZ
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:25 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:14 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
请填处理意见