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1020490511

银虫 (小有名气)

[求助] ph和盐浓度对his标签蛋白挂柱有何影响? 已有1人参与

鄙人最近在做his标签蛋白纯化,遇到一些问题:1,盐浓度nacl对挂柱有何影响?多少的盐浓度对挂柱比较好?我用的是0.15 M的氯化钠。2.蛋白所带电荷对镍柱纯化有何影响?目的蛋白等电点预测为6.4。目前A液用的ph值为7.4。还请各位大侠多多指教!

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pennchem

专家顾问 (正式写手)

盐浓度基本不影响
pH值越高,越有利于挂柱
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-09-22 20:08:34
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1020490511

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-09-22 20:08:34
盐浓度基本不影响
pH值越高,越有利于挂柱

再问一下大侠,在用AKTA做纯化时,如何抵消咪唑的吸收峰?我在过柱子时,随着B液咪唑百分比上升,紫外吸收也成斜线上升。影响蛋白吸收峰的显示。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-09-23 10:52:33
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
咪唑是共轭环,在紫外吸收是一定的,没有想过要消除,不太重要吧,如果要定量,收集蛋白后以收集部分咪唑浓度调零,然后再测280。
行至水穷处,坐看云起时
4楼2014-09-23 23:15:58
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