| 查看: 3003 | 回复: 7 | |||
flowerkiddy新虫 (小有名气)
|
[求助]
His标签蛋白纯化过程中容易沉淀，提高盐离子、改变pH是否可以？ 已有2人参与
|
|
请教各位虫友！ 融合蛋白是一个醇脱氢酶，理论pI=6.3，C端氮端分别带His6。 纯化条件：镍珠纯化，没上柱子，PBS pH7.4（pH可能有0.3个单位的误差、试了几个pH计都没法完全校准），0.5M NaCl。 现象：胶上看诱导表达的可溶性蛋白量还是不错的。 结合的很好，珠子明显变为白色。 50mM咪唑开始洗脱时就明显有白色沉淀析出。 大部分蛋白500mM咪唑洗脱下来，纯化完可以得到一些活性蛋白的，但是浓度不高。 得到的纯化蛋白透析时，盐浓度不变，只降咪唑浓度，又有沉淀析出。 问题：蛋白稳定性问题能否通过提高NaCl浓度至1M甚至更高？PBSpH升高到8或8.5甚至更好是否合适？ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力
已经有3人回复
-
有没有H口的？有收到消息的吗？
已经有3人回复
-
十年后又回来了，论文投稿求助
已经有3人回复
-
纯娱乐，不喜欢勿喷
已经有10人回复
-
面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！
已经有26人回复
-
面上提前没消息，有中的吗
已经有18人回复
-
娱乐
已经有4人回复
-
系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了
已经有16人回复
-
一个有机合成实验室都需要哪些设备？
已经有10人回复
-
什么时候能放榜呀？
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题
已经有7人回复
- FPLC蛋白纯化堵柱子？
已经有24人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 【求助/交流】Ni柱洗脱蛋白
已经有6人回复
pennchem
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +21 - BioEPI: 5
- 应助: 297 (大学生)
- 金币: 10709.5
- 散金: 65
- 红花: 28
- 帖子: 596
- 在线: 1110小时
- 虫号: 2139205
- 注册: 2012-11-21
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学
2楼2014-03-17 14:14:37
克隆大虾
铁杆木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 133 (高中生)
- 金币: 6061.9
- 散金: 236
- 红花: 10
- 帖子: 2374
- 在线: 1346.4小时
- 虫号: 93868
- 注册: 2005-09-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2014-03-18 02:06:22
flowerkiddy
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 289.3
- 散金: 4
- 帖子: 75
- 在线: 33.8小时
- 虫号: 2545330
- 注册: 2013-07-14
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2014-03-19 15:51:22
会思想的芦苇
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1415.8
- 红花: 2
- 帖子: 360
- 在线: 166.2小时
- 虫号: 1360621
- 注册: 2011-08-04
- 专业: 生物技术药物
5楼2014-03-19 17:19:31
pennchem
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +21 - BioEPI: 5
- 应助: 297 (大学生)
- 金币: 10709.5
- 散金: 65
- 红花: 28
- 帖子: 596
- 在线: 1110小时
- 虫号: 2139205
- 注册: 2012-11-21
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学
6楼2014-03-19 20:29:49
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2020-06-22 22:25:19
pennchem
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +21 - BioEPI: 5
- 应助: 297 (大学生)
- 金币: 10709.5
- 散金: 65
- 红花: 28
- 帖子: 596
- 在线: 1110小时
- 虫号: 2139205
- 注册: 2012-11-21
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学
8楼2020-06-23 07:53:43