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flowerkiddy新虫 (小有名气)
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[求助]
His标签蛋白纯化过程中容易沉淀，提高盐离子、改变pH是否可以？ 已有2人参与
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请教各位虫友！ 融合蛋白是一个醇脱氢酶，理论pI=6.3，C端氮端分别带His6。 纯化条件：镍珠纯化，没上柱子，PBS pH7.4（pH可能有0.3个单位的误差、试了几个pH计都没法完全校准），0.5M NaCl。 现象：胶上看诱导表达的可溶性蛋白量还是不错的。 结合的很好，珠子明显变为白色。 50mM咪唑开始洗脱时就明显有白色沉淀析出。 大部分蛋白500mM咪唑洗脱下来，纯化完可以得到一些活性蛋白的，但是浓度不高。 得到的纯化蛋白透析时，盐浓度不变，只降咪唑浓度，又有沉淀析出。 问题：蛋白稳定性问题能否通过提高NaCl浓度至1M甚至更高？PBSpH升高到8或8.5甚至更好是否合适？ 谢谢！ |
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flowerkiddy
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4楼2014-03-19 15:51:22
pennchem
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2楼2014-03-17 14:14:37
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5楼2014-03-19 17:19:31