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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 磷酸盐缓冲液的浓度对蛋白的影响
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雪湛蓝

金虫 (正式写手)

[求助] 磷酸盐缓冲液的浓度对蛋白的影响

pH7.0的磷酸盐缓冲液的不同浓度对蛋白的是否有影响？我是要用来做过柱的洗脱剂，过Sephadex G-75的柱。
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脚踏实地追求科学真理！
1楼 2011-04-22 10:58:09
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徐亚萍

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+1): 谢谢分享 2011-04-22 19:15:29
雪湛蓝(金币+1): 2011-04-23 12:09:49
看天(金币+5): 鼓励分享经验：我最近测酶活发现tris缓冲液对酶活性有极大的抑制作用 可能也是浓度过高 2011-04-25 08:56:05
看天: 2011-04-25 08:56:39
盐的浓度过高会是蛋白失活，我用Tris-NaCl纯化时得出的经验；供参考，不一定对。
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朋友-一生的财富
2楼2011-04-22 14:51:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
50mM
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-04-22 19:41:42
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dahuaishu911

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖，鼓励交流 2011-04-23 13:38:40
只要pH远离等电点并且所调的PH不会让蛋白变性，还有浓度不要太高，我也经常过superdex 75 和200 用的是pbs缓冲液
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4楼2011-04-22 22:40:44
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dahuaishu911

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

雪湛蓝(金币+2): 2011-04-23 12:09:20
只要pH远离等电点并且所调的PH不会让蛋白变性，还有浓度不要太高，我也经常过superdex 75 和200 用的是pbs缓冲液
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5楼2011-04-22 22:41:44
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励 2011-04-25 20:59:40
盐浓度过高可能破坏蛋白亚基之间的相互作用 引起亚基解离；盐浓度过低，溶液的离子强度弱会影响洗脱效果，所以有时候洗脱液中会加100 mM左右的氯化钠，梯度洗脱也是这个原理。
一般PBS洗脱 浓度可以考虑50-100 mM.
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6楼2011-04-24 12:32:02
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雪湛蓝

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by MaoNaiJi at 2011-04-24 12:32:02:
盐浓度过高可能破坏蛋白亚基之间的相互作用 引起亚基解离；盐浓度过低，溶液的离子强度弱会影响洗脱效果，所以有时候洗脱液中会加100 mM左右的氯化钠，梯度洗脱也是这个原理。
一般PBS洗脱 浓度可以考虑50-100 mM.

PBS的浓度是指磷酸盐的总浓度吗？还是单指磷酸二氢钠或磷酸氢二钠或是钾盐的浓度？
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脚踏实地追求科学真理！
7楼2011-04-24 15:28:16
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孟孟525

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-04-25 21:00:04
盐浓度不宜过高，否则会影响蛋白稳定性。而过低会导致PH缓冲效果不好，所以一般在50mM左右。PH值则要根据蛋白等电点而定，要远离等电电，否则容易使蛋白沉降。
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8楼2011-04-24 15:34:41
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

雪湛蓝(金币+1): 很热心！ 2011-04-25 17:22:31
引用回帖:
Originally posted by 雪湛蓝 at 2011-04-24 15:28:16:
PBS的浓度是指磷酸盐的总浓度吗？还是单指磷酸二氢钠或磷酸氢二钠或是钾盐的浓度？

指磷酸盐的总浓度 例如可以配含有100 mM NaCl的50 mM PBS 记得纯化后尽快将氯化钠透析掉
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9楼2011-04-25 00:06:54
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雪湛蓝

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by MaoNaiJi at 2011-04-25 00:06:54:
指磷酸盐的总浓度 例如可以配含有100 mM NaCl的50 mM PBS 记得纯化后尽快将氯化钠透析掉

另外我还想问一下，过完的胶用洗脱液PBS浸泡着保存一周的时间是否可以？只保存一周。
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脚踏实地追求科学真理！
10楼2011-04-25 17:21:42
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