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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 磷酸盐缓冲液的浓度对蛋白的影响
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 雪湛蓝 at 2011-04-25 17:21:42:
另外我还想问一下，过完的胶用洗脱液PBS浸泡着保存一周的时间是否可以？只保存一周。

放4度保存 我存过不止一周的时间 没什么问题 原则上要加些叠氮钠防腐
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11楼2011-04-25 23:43:16
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zhaoling922

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by MaoNaiJi at 2011-04-24 12:32:02:
盐浓度过高可能破坏蛋白亚基之间的相互作用 引起亚基解离；盐浓度过低，溶液的离子强度弱会影响洗脱效果，所以有时候洗脱液中会加100 mM左右的氯化钠，梯度洗脱也是这个原理。
一般PBS洗脱 浓度可以考虑50-100 mM.

我用的0.2M的磷酸缓冲液过Sephadex,过完柱子蛋白活性降低了,是缓冲液浓度的问题吗
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12楼2011-04-28 09:41:04
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by zhaoling922 at 2011-04-28 09:41:04:
我用的0.2M的磷酸缓冲液过Sephadex,过完柱子蛋白活性降低了,是缓冲液浓度的问题吗

你怎么知道活性降低了？降低是正常的 不是太低就行了
你是在浓缩之后测的活么？如果没有浓缩 活性肯定很低的 因为相当于被稀释了
另外过柱的时候 最好能在4°C 层析柜中进行
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zhaoling922
13楼2011-04-28 13:14:01
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zhaoling922

金虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by MaoNaiJi at 2011-04-28 13:14:01:
你怎么知道活性降低了？降低是正常的 不是太低就行了
你是在浓缩之后测的活么？如果没有浓缩 活性肯定很低的 因为相当于被稀释了
另外过柱的时候 最好能在4°C 层析柜中进行

谢谢啦，我是过完柱子后冻干测的，我这个实验以活性来追踪，所以降低了不好
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14楼2011-07-06 17:53:44
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MaoNaiJi

金虫 (正式写手)
哦！冻干就这样的 活性大幅度下降 其实没必要弄成干粉的 你想酶在使用的时候都是在液体中用的 商品酶很多也是保存在液体当中的
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15楼2011-07-06 20:21:24
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