| 查看: 4792 | 回复: 11 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
海之韵-哈哈银虫 (小有名气)
|
[求助]
镍柱纯化His标签蛋白，洗脱不下来已有4人参与
|
||
镍柱纯化带有组氨酸标签的蛋白，用了各种浓度的咪唑进行洗脱还是洗脱不下来，蛋白还是挂在柱子上，怎么办啊，感觉看不到希望了，希望大家帮我分析一下，发不了文章就毕不了业啦。好郁闷啊 由于蛋白表达量少所以选择将酶液多次上柱，洗脱液是由50mM pH7.5的PBS配制，氯化钠浓度为400mM 1:10mM咪唑洗脱；2:15mM咪唑洗脱；3:20mM咪唑洗脱；4:50mM咪唑洗脱；5:500微升200mM咪唑洗脱；6:1毫升500mM咪唑洗脱；7:1毫升1000mM咪唑洗脱；8:最后离心剩下的resin；从第8泳道可以看出大部分蛋白还是挂在柱子上的。纯化后要得到有活性的蛋白，计算回收率。如果在升高咪唑浓度怕高浓度咪唑会影响到酶的活性。但是现在的回收率太低了，怎样才能提高纯化效率啊？  图片1.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
真诚求助：手里的省社科项目结项要求主持人一篇中文核心，有什么渠道能发核心吗
已经有8人回复
-
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件
已经有5人回复
-
论文投稿，期刊推荐
已经有6人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有4人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有14人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有5人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
求助，镍柱纯化蛋白，蛋白挂不上去
已经有17人回复- 求钙调蛋白CLM3用HIS标签的纯化protocol
已经有6人回复
- 镍柱亲和层析纯化
已经有6人回复
- 亲和镍柱那个公司的好？
已经有6人回复
- 蛋白过镍柱纯化，在用咪唑洗脱后需要做透析，透析怎么做？？？
已经有15人回复
- 蛋白纯化时目的蛋白没有洗脱下来
已经有14人回复
- 镍柱蛋白纯化，求好心人讲解。
已经有4人回复
- His标签的蛋白纯化柱子
已经有10人回复
- 关于镍柱纯化蛋白
已经有10人回复
- 关于变性条件下his-tag重组融合蛋白不结合镍柱以及部分结合镍柱情况
已经有17人回复
- 蛋白纯化镍柱、分子筛
已经有9人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助/交流】为什么镍柱纯化可溶性蛋白，电泳结果总是显示不纯呢？
已经有9人回复
- 【求助/交流】镍柱纯化，洗不下来啊。。。
已经有25人回复
caas2006
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3726.9
- 帖子: 332
- 在线: 278.4小时
- 虫号: 457645
- 注册: 2007-11-12
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2014-01-03 17:29:13
huaqiangliu
新虫 (小有名气)
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 1124.3
- 红花: 3
- 帖子: 144
- 在线: 84.9小时
- 虫号: 2289755
- 注册: 2013-02-20
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
10楼2014-01-07 15:04:25
caas2006
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3726.9
- 帖子: 332
- 在线: 278.4小时
- 虫号: 457645
- 注册: 2007-11-12
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2014-01-03 17:24:02
克隆大虾
铁杆木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 133 (高中生)
- 金币: 5976.9
- 散金: 236
- 红花: 10
- 帖子: 2367
- 在线: 1336.5小时
- 虫号: 93868
- 注册: 2005-09-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2014-01-03 17:46:14
lpzl
木虫 (正式写手)
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 4125.1
- 红花: 2
- 帖子: 306
- 在线: 526.2小时
- 虫号: 2412684
- 注册: 2013-04-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2014-01-03 18:41:07
海之韵-哈哈
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 234.6
- 帖子: 185
- 在线: 61.4小时
- 虫号: 2028353
- 注册: 2012-09-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2014-01-04 19:47:02
海之韵-哈哈
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 234.6
- 帖子: 185
- 在线: 61.4小时
- 虫号: 2028353
- 注册: 2012-09-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2014-01-05 13:44:29
海之韵-哈哈
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 234.6
- 帖子: 185
- 在线: 61.4小时
- 虫号: 2028353
- 注册: 2012-09-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2014-01-05 13:46:16
海之韵-哈哈
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 234.6
- 帖子: 185
- 在线: 61.4小时
- 虫号: 2028353
- 注册: 2012-09-25
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2014-01-05 13:52:41