应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 镍柱纯化His标签蛋白，洗脱不下来
51/1返回列表
查看: 5663  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化His标签蛋白，洗脱不下来 已有4人参与

镍柱纯化带有组氨酸标签的蛋白，用了各种浓度的咪唑进行洗脱还是洗脱不下来，蛋白还是挂在柱子上，怎么办啊，感觉看不到希望了，希望大家帮我分析一下，发不了文章就毕不了业啦。好郁闷啊                                                                                                     由于蛋白表达量少所以选择将酶液多次上柱，洗脱液是由50mM pH7.5的PBS配制，氯化钠浓度为400mM                                                                         1:10mM咪唑洗脱；2:15mM咪唑洗脱；3:20mM咪唑洗脱；4:50mM咪唑洗脱；5:500微升200mM咪唑洗脱；6:1毫升500mM咪唑洗脱；7:1毫升1000mM咪唑洗脱；8:最后离心剩下的resin；从第8泳道可以看出大部分蛋白还是挂在柱子上的。纯化后要得到有活性的蛋白，计算回收率。如果在升高咪唑浓度怕高浓度咪唑会影响到酶的活性。但是现在的回收率太低了，怎样才能提高纯化效率啊？
镍柱纯化His标签蛋白，洗脱不下来
图片1.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
严以律已，宽以待人
1楼 2014-01-03 16:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lpzl at 2014-01-03 18:41:07
可以试试不同PH值的平衡液洗脱目的蛋白。。。

pH值最好设几个啊？不同PH值的平衡洗脱液加咪唑吗?加多大浓度好啊？
赞一下 回复此楼
严以律已，宽以待人
8楼2014-01-05 13:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

caas2006

木虫 (正式写手)
★ ★
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2014-01-07 17:36:18
是不是洗脱缓冲液的pH太高了哦
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 17:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caas2006

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-01-07 17:36:31
1. 如果N-和C-同时带有组氨酸标签，会使洗脱的咪唑浓度增加
2.蛋白本身的PI过高也会增加洗脱难度
3.洗脱缓冲液的pH过高
4.纯化过程中蛋白变性沉淀
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-03 17:29:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+1, 可能 2014-01-07 17:36:48
也有可能是咪唑有问题。新手还是以前纯化过蛋白？
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-03 17:46:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:36 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:03 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:56 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭