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永峰1230铜虫 (小有名气)
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重组菌质粒提取失败 已有6人参与
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目的基因和pet28α 连接后 涂布 挑单菌落。 单菌落 LB培养--TB培养，提取质粒，但是提取不出来质粒。 培养基中都加有抗生 质粒是用生工试剂盒提取，，已证明试剂盒没有问题。 请问，提取不出来质粒是什么原因呢？？ |
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huyan0817
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8楼2014-09-11 10:56:56
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实验室里很多杂菌都是有对卡纳的耐受性的，LZ的问题应该出现在感受态细胞本身或者转化过程中染了杂菌。 1.建议以后做转化的时候各种对照一定要做好。 2.倒平板的时候抗生素最好还是提前加到琼脂里。 3.抗生素的量一定要加足。转化的时候操作也要注意，如果配的CaCl2已经用了很多次，最好重新配置灭菌 对于你现在平板上的那批转化子，尽量多挑转化子做菌落PCR看是否有基因是可行的方案，但是假阳性也是可能的，就算扩出条带也不一定有质粒，还是重新做一次比较可靠。 |
9楼2014-09-11 18:16:27
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