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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~~~~大肠杆菌内质粒会不会自行发生同源重组？
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liondolphin

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助~~~~大肠杆菌内质粒会不会自行发生同源重组？

现在在构建质粒，使用的菌株是大肠杆菌BL21（DE3），DH5a，在质粒上加了三段终止子，都是一样的，大约400+bp，话说它们会不会发生同源重组呀，求高手解答~~~~~
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1楼 2013-11-05 11:53:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liondolphin: 金币+1 2013-11-07 11:00:19
不会，DH5α和Top10都是rec缺陷型菌株
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5楼2013-11-05 17:41:39
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普通回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)
不明白。~
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
2楼2013-11-05 12:38:13
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liondolphin: 金币+1 2013-11-07 11:00:27
不会吧，好像没有回文序列吧？重组往哪插入啊？
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3楼2013-11-05 15:11:28
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liondolphin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvshilu at 2013-11-05 15:11:28
不会吧，好像没有回文序列吧？重组往哪插入啊？

不会就太好了~就最近刚开始看同源重组的文献，觉得有三段400bp的同源序列会不会把三个之间的序列通过同源重组给调换位置
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4楼2013-11-05 16:46:05
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gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 回帖置顶 2013-11-05 18:12:20
gyesang: 取消置顶 2013-11-05 18:12:27
gyesang: 编辑内容 2013-11-05 18:12
gyesang: 违规存档, 请不要发布与回答问题无关的内容，谢谢理解与配合哈！ 2013-11-05 18:13:19
liondolphin: 金币+3 2013-11-07 10:58:58
有可能，即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况，我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组，

[ Last edited by gyesang on 2013-11-5 at 18:12 ]
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6楼2013-11-05 18:04:04
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liondolphin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2013-11-05 18:04:04
有可能，即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况，我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组，

请问你们实验室是怎么做的？我的质粒是从takara买的pSTV28,好像跟pACYC184类似,这个如果构建好之后导入到大肠里会自己重组吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2013-11-06 10:17:09
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ljy241

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2013-11-05 18:04:04
有可能，即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况，我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组，

我也发现用DH5a会发生重组，虽然概率比较低。
我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列，长度分别约300bp, 500bp, 1kb. 鉴定连接产物时，用菌液pcr看两个接口是否正确，菌液摇几个小时还是清澈的，不过pcr能出来，而且有很多阳性克隆。摇过夜能看到细菌，但我怀疑长出来的是杂菌，因为质粒抽不出来。
现在这个载体都构建半年多了，一直是这个问题，菌液pcr鉴定正确，就是提不出质粒，请高手指点下是怎么回事。我是怀疑把氨苄抗性基因的启动子破坏了，或者是复制子重组掉了。
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8楼2014-02-21 12:58:32
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ljy241 at 2014-02-21 12:58:32
我也发现用DH5a会发生重组，虽然概率比较低。
我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列，长度分别约300bp, 500bp, 1kb. 鉴定连接产物时，用菌液pcr看两个接口是否正确，菌液摇几个小时还是清澈的，不过pcr能出来， ...

我也怀疑是同源重组问题，我质粒有两段相同的，而且质粒也出现了奇怪的特征
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9楼2015-01-26 10:00:06
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)
请问楼主的质粒顺利吗
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10楼2015-01-26 10:06:04
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