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liondolphin

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助~~~~大肠杆菌内质粒会不会自行发生同源重组?

现在在构建质粒,使用的菌株是大肠杆菌BL21(DE3),DH5a,在质粒上加了三段终止子,都是一样的,大约400+bp,话说它们会不会发生同源重组呀,求高手解答~~~~~
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liondolphin: 金币+1 2013-11-07 11:00:19
不会,DH5α和Top10都是rec缺陷型菌株
5楼2013-11-05 17:41:39
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普通回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)

不明白。~
应助之星就是我~没错。你没有看错~
2楼2013-11-05 12:38:13
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lvshilu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liondolphin: 金币+1 2013-11-07 11:00:27
不会吧,好像没有回文序列吧?重组往哪插入啊?
需要金币
3楼2013-11-05 15:11:28
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liondolphin

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvshilu at 2013-11-05 15:11:28
不会吧,好像没有回文序列吧?重组往哪插入啊?

不会就太好了~就最近刚开始看同源重组的文献,觉得有三段400bp的同源序列会不会把三个之间的序列通过同源重组给调换位置
4楼2013-11-05 16:46:05
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gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 回帖置顶 2013-11-05 18:12:20
gyesang: 取消置顶 2013-11-05 18:12:27
gyesang: 编辑内容 2013-11-05 18:12
gyesang: 违规存档, 请不要发布与回答问题无关的内容,谢谢理解与配合哈! 2013-11-05 18:13:19
liondolphin: 金币+3 2013-11-07 10:58:58
有可能,即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况,我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组,

[ Last edited by gyesang on 2013-11-5 at 18:12 ]
6楼2013-11-05 18:04:04
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liondolphin

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2013-11-05 18:04:04
有可能,即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况,我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组,

请问你们实验室是怎么做的?我的质粒是从takara买的pSTV28,好像跟pACYC184类似,这个如果构建好之后导入到大肠里会自己重组吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2013-11-06 10:17:09
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ljy241

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gastrodia at 2013-11-05 18:04:04
有可能,即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况,我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组,

我也发现用DH5a会发生重组,虽然概率比较低。
我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列,长度分别约300bp, 500bp, 1kb. 鉴定连接产物时,用菌液pcr看两个接口是否正确,菌液摇几个小时还是清澈的,不过pcr能出来,而且有很多阳性克隆。摇过夜能看到细菌,但我怀疑长出来的是杂菌,因为质粒抽不出来。
现在这个载体都构建半年多了,一直是这个问题,菌液pcr鉴定正确,就是提不出质粒,请高手指点下是怎么回事。我是怀疑把氨苄抗性基因的启动子破坏了,或者是复制子重组掉了。
8楼2014-02-21 12:58:32
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ljy241 at 2014-02-21 12:58:32
我也发现用DH5a会发生重组,虽然概率比较低。
我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列,长度分别约300bp, 500bp, 1kb. 鉴定连接产物时,用菌液pcr看两个接口是否正确,菌液摇几个小时还是清澈的,不过pcr能出来, ...

我也怀疑是同源重组问题,我质粒有两段相同的,而且质粒也出现了奇怪的特征
9楼2015-01-26 10:00:06
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)

请问楼主的质粒顺利吗
10楼2015-01-26 10:06:04
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