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liondolphin

银虫 (初入文坛)

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[求助] 求助~~~~大肠杆菌内质粒会不会自行发生同源重组？

现在在构建质粒，使用的菌株是大肠杆菌BL21（DE3），DH5a，在质粒上加了三段终止子，都是一样的，大约400+bp，话说它们会不会发生同源重组呀，求高手解答~~~~~

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1楼2013-11-05 11:53:08

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ljy241

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by gastrodia at 2013-11-05 18:04:04
有可能，即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况，我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组，

我也发现用DH5a会发生重组，虽然概率比较低。
我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列，长度分别约300bp, 500bp, 1kb. 鉴定连接产物时，用菌液pcr看两个接口是否正确，菌液摇几个小时还是清澈的，不过pcr能出来，而且有很多阳性克隆。摇过夜能看到细菌，但我怀疑长出来的是杂菌，因为质粒抽不出来。
现在这个载体都构建半年多了，一直是这个问题，菌液pcr鉴定正确，就是提不出质粒，请高手指点下是怎么回事。我是怀疑把氨苄抗性基因的启动子破坏了，或者是复制子重组掉了。