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设计了两对引物，但是结果不一样 已有2人参与
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设计了两队引物，但是结果不一样。模板是cDNA，p出来的是不跨内含子的那对引物，P不出来的是跨内含子的那对引物（但是阳性对照P出来了），觉得很奇怪，所以我怀疑是DNA污染，因此我用这个样品p了一个文献上不能表达的基因，如果有基因污染的话，按理说应该P得出来，但是奇怪的是没有P出来（阳性对照P出来了），所以现在不知道到底是什么原因导致的，求大神解答，附图如下： 谢谢   不跨内含子的引物.jpg  跨内含子.jpg  已知不表达的基因.jpg |
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我欲乘风归去
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3楼2014-09-08 09:15:45
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
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lmc2537: 金币+2, ★有帮助 2014-09-09 19:59:50
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| 你不跨内含子的引物能扩出来，跨的扩不出来，很可能不是cDNA出问题，而是你引物出问题了，你是按照预测的序列来设计的吧，很可能预测序列和真实序列有点出入导致，要想验证这个想法对不对你可以再外围不跨区域再设计对引物，扩出来后扩个二次就清楚了 |
2楼2014-09-08 08:34:29
4楼2014-09-09 10:07:47
5楼2014-09-09 10:09:23
