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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教测序结果!出现碱基突变和缺失了
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well_想太多

新虫 (小有名气)

[求助] 请教测序结果!出现碱基突变和缺失了已有1人参与

我用自己设计的引物扩增一段cds序列,结果出来了与已知的cds序列比对发现有一个碱基的缺失和17个碱基的突变,我想问下,这样能直接往下面做克隆,表达吗?还是需要再重新pcr一下?主要我怕后面做表达会出现蛋白表达不正确的情况
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1楼2014-09-07 11:49:14
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
well_想太多(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-07 20:55:05
西门吹雪170: 应助指数+1 2014-09-07 20:55:23
well_想太多: 金币+3, ★有帮助 2014-09-07 21:54:07
碱基缺失了才是致命的，缺失后面的全部移码了，你去把测过的序列翻译成氨基酸看一下和原来的氨基酸序列比对一下，就知道这条序列行不行了
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。
6楼2014-09-07 18:22:45
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xiaomdj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-07 17:28:26
当然要重新pcr，否则后续实验可能遇到麻烦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-07 12:00:53
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well_想太多

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaomdj at 2014-09-07 12:00:53
当然要重新pcr，否则后续实验可能遇到麻烦

那需要在哪些方面注意呢?我的循环次数是35,我看论坛里其他前辈说30就够了
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3楼2014-09-07 12:25:35
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
30个循环确实够了，可以换高保真酶扩增（连接T载体时注意加A尾）
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。
4楼2014-09-07 14:03:10
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