应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白在BL21(DE3)中表达，存在包涵体
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 2804  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白在BL21(DE3)中表达，存在包涵体 已有3人参与

我的酶在大肠杆菌中表达后，刚开始表达酶活很高，SDS-PAGE显示蛋白在上清液中，后来某一天酶活突然下降，降到原始酶活的1/3左右，重新转化筛选仍没有效果，SDS-PAGE显示上清中的蛋白量减少了，而破碎后的沉淀中存在很多，这应该是以包涵体的形式存在吧？每次的发酵条件都一样，为什么刚开始没有而后来出现了呢？有什么解决方法吗？希望各位虫友不吝赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-05 19:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

俗妮儿~

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-06 19:16:19
应该不是蛋白表达的问题，你确定每次发酵条件都一样？
看你的情况好像是蛋白产量太高，在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧，比如说温度时间什么的，再不行就试试分子伴侣质粒，这个东东有助于蛋白的折叠。
祝你实验顺利！
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2014-09-06 12:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-07 17:49:58
本帖内容被屏蔽
6楼2014-09-06 16:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-01 12:25:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-12-01 10:14:35
甘油管里的...

最好不要这样，我都是划线培养个板子，每次挑一个单克隆至5mL LB培养基中，先摇16个小时活化，然后拿活化的菌液接种，再诱导
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-12-01 12:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小小cool

金虫 (正式写手)
菌种退化了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
2楼2014-09-05 20:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-09-05 20:54:14
菌种退化了

可是重新转过筛选过啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-05 21:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 俗妮儿~ at 2014-09-06 12:19:35
应该不是蛋白表达的问题，你确定每次发酵条件都一样？
看你的情况好像是蛋白产量太高，在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧，比如说温度时间什么的，再不行就试试分子伴侣质粒，这个东东 ...

每次发酵条件都是一样的，接种OD值，IPTG浓度，诱导时间，温度，都控制的一样的，后来可溶性的蛋白就突然变少了，酶活也降低，发现都跑到沉淀里去了。
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-06 14:56:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bolysu at 2014-09-06 16:10:36
质粒重新构建下，或者从DH5a菌种提原来的质粒重新导入表达菌，BL21有重组功能导致质粒不稳定

重新把DH5a提出来的质粒转到BL21中筛选过，感觉没有多大的效果。
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-06 22:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

想问一下，你接种的菌液是怎么来的？
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-28 14:34:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuxiuaza at 2014-11-28 14:34:45
想问一下，你接种的菌液是怎么来的？

甘油管里的
回复此楼
9楼2014-12-01 10:14:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏天的普洱茶 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 kikiki7 2026-03-30 7/350 2026-03-30 19:22 by Wang200018
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +9 Youth_ 2026-03-30 9/450 2026-03-30 18:45 by 544594351
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +5 小小机灵虫 2026-03-29 11/550 2026-03-30 15:02 by Wang200018
[考研] 071010 323 分求调剂 +3 Baekzhy 2026-03-27 3/150 2026-03-30 14:24 by andresqi
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +6 来财aa 2026-03-25 6/300 2026-03-30 09:48 by 青海小西牛
[考研] 290求调剂 +3 dfffsar 2026-03-29 3/150 2026-03-29 22:38 by 毛毛毛阿莫2
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 340求调剂 +5 jhx777 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 085701环境工程求调剂 +9 多久上课 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:58 by fmesaito
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭