24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

应助: 69 (初中生)
金币: 5116.5
红花: 18
帖子: 1048
在线: 441.4小时
虫号: 1427657
注册: 2011-10-05
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 重组蛋白在BL21(DE3)中表达，存在包涵体已有3人参与

我的酶在大肠杆菌中表达后，刚开始表达酶活很高，SDS-PAGE显示蛋白在上清液中，后来某一天酶活突然下降，降到原始酶活的1/3左右，重新转化筛选仍没有效果，SDS-PAGE显示上清中的蛋白量减少了，而破碎后的沉淀中存在很多，这应该是以包涵体的形式存在吧？每次的发酵条件都一样，为什么刚开始没有而后来出现了呢？有什么解决方法吗？希望各位虫友不吝赐教

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

BL21(DE3)表达乳糖酶已经有5人回复
求助！小分子重组蛋白不表达已经有6人回复
关于IPTG在人用药物蛋白大肠杆菌发酵表达中的应用问题已经有2人回复
请问在大肠杆菌中表达蛋白时会不会只表达一段目的蛋白？怎么解决呢？求高人指点已经有12人回复
原核表达蛋白量很低已经有13人回复
C41表达重组蛋白已经有7人回复
大肠杆菌BL21表达包涵体的问题已经有8人回复
如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体已经有19人回复
原核表达蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊已经有12人回复
pET28a载体蛋白表达为包涵体已经有5人回复
大肠杆菌BL21菌株表达目的蛋白时，菌液破碎前后的浑浊程度变化很不明显已经有5人回复
重组蛋白是包涵体怎么溶已经有42人回复
T7载体的IPTG诱导已经有10人回复
【求助】包涵体表达与可溶性表达已经有6人回复
【求助/交流】BL21表达已经有4人回复
【求助/交流】原核表达蛋白纯化已经有29人回复

1楼 2014-09-05 19:09:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

应助: 69 (初中生)
金币: 5116.5
红花: 18
帖子: 1048
在线: 441.4小时
虫号: 1427657
注册: 2011-10-05
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

引用回帖:

4楼: Originally posted by 俗妮儿~ at 2014-09-06 12:19:35
应该不是蛋白表达的问题，你确定每次发酵条件都一样？
看你的情况好像是蛋白产量太高，在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧，比如说温度时间什么的，再不行就试试分子伴侣质粒，这个东东 ...

每次发酵条件都是一样的，接种OD值，IPTG浓度，诱导时间，温度，都控制的一样的，后来可溶性的蛋白就突然变少了，酶活也降低，发现都跑到沉淀里去了。