24小时热门版块排行榜    

查看: 3131  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白在BL21(DE3)中表达,存在包涵体 已有3人参与

我的酶在大肠杆菌中表达后,刚开始表达酶活很高,SDS-PAGE显示蛋白在上清液中,后来某一天酶活突然下降,降到原始酶活的1/3左右,重新转化筛选仍没有效果,SDS-PAGE显示上清中的蛋白量减少了,而破碎后的沉淀中存在很多,这应该是以包涵体的形式存在吧?每次的发酵条件都一样,为什么刚开始没有而后来出现了呢?有什么解决方法吗?希望各位虫友不吝赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-09-05 20:54:14
菌种退化了

可是重新转过筛选过啊
3楼2014-09-05 21:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

小小cool

金虫 (正式写手)

菌种退化了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-09-05 20:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俗妮儿~

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-06 19:16:19
应该不是蛋白表达的问题,你确定每次发酵条件都一样?
看你的情况好像是蛋白产量太高,在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧,比如说温度时间什么的,再不行就试试分子伴侣质粒,这个东东有助于蛋白的折叠。
祝你实验顺利!
4楼2014-09-06 12:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 俗妮儿~ at 2014-09-06 12:19:35
应该不是蛋白表达的问题,你确定每次发酵条件都一样?
看你的情况好像是蛋白产量太高,在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧,比如说温度时间什么的,再不行就试试分子伴侣质粒,这个东东 ...

每次发酵条件都是一样的,接种OD值,IPTG浓度,诱导时间,温度,都控制的一样的,后来可溶性的蛋白就突然变少了,酶活也降低,发现都跑到沉淀里去了。
5楼2014-09-06 14:56:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +4 SCSIOyxguo 2026-09-03 7/350 2026-09-05 10:39 by Honglianlian
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见