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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白在BL21(DE3)中表达,存在包涵体 已有3人参与

我的酶在大肠杆菌中表达后,刚开始表达酶活很高,SDS-PAGE显示蛋白在上清液中,后来某一天酶活突然下降,降到原始酶活的1/3左右,重新转化筛选仍没有效果,SDS-PAGE显示上清中的蛋白量减少了,而破碎后的沉淀中存在很多,这应该是以包涵体的形式存在吧?每次的发酵条件都一样,为什么刚开始没有而后来出现了呢?有什么解决方法吗?希望各位虫友不吝赐教
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by bolysu at 2014-09-06 16:10:36
质粒重新构建下,或者从DH5a菌种提原来的质粒重新导入表达菌,BL21有重组功能导致质粒不稳定

重新把DH5a提出来的质粒转到BL21中筛选过,感觉没有多大的效果。
7楼2014-09-06 22:45:22
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查看全部 13 个回答

小小cool

金虫 (正式写手)

菌种退化了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-09-05 20:54:14
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-09-05 20:54:14
菌种退化了

可是重新转过筛选过啊
3楼2014-09-05 21:24:00
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俗妮儿~

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-06 19:16:19
应该不是蛋白表达的问题,你确定每次发酵条件都一样?
看你的情况好像是蛋白产量太高,在菌体内大量积累就形成了包涵体。
干脆重新优化一下发酵条件吧,比如说温度时间什么的,再不行就试试分子伴侣质粒,这个东东有助于蛋白的折叠。
祝你实验顺利!
4楼2014-09-06 12:19:35
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