24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1053  |  回复: 5

guoguo201209

新虫 (小有名气)

[求助] PCR高手请进!这个PCR 扩增条件看不懂,求高手指点!急!急! 已有1人参与

我通过查文献,要扩2对长引物(6kb,9kb),扩增条件是:

92℃变性 2min
92℃变性 10sec
50℃退火 30sec 10 个循环
60℃延伸 10min
92℃变性 2min
92℃变性 10sec
50℃退火 30sec 20 个循环,每个循环加 10sec
60℃延伸 10min
60℃延伸 10min

就是后20个循环,每个循环加10S,在哪里加呀,PCR仪上能分开两部分吗?为什么第一个10个循环后,还要来一个92度预变性2min。
求高手指点,急呀!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR程序可以分成几部分的,每个循环加10s也是可以设置。自己摸索一下,或者根据你们实验室PCR的品牌查说明书或者直接找售后人员询问吧。
至于中间还有一个“92度预变性2min”,也许只是作者的习惯而已。。。不过设置起来也不麻烦,没有必要去改一下。
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
2楼2014-08-31 19:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoguo201209

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hongqifei at 2014-08-31 19:54:34
PCR程序可以分成几部分的,每个循环加10s也是可以设置。自己摸索一下,或者根据你们实验室PCR的品牌查说明书或者直接找售后人员询问吧。
至于中间还有一个“92度预变性2min”,也许只是作者的习惯而已。。。不过设 ...

再问一下楼上,每个循环加10S是总共加10S,还是说变性,退火,延伸各加10S呢?不知这是什么原理,和总共30个循环有差别吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-08-31 23:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by guoguo201209 at 2014-08-31 23:57:14
再问一下楼上,每个循环加10S是总共加10S,还是说变性,退火,延伸各加10S呢?不知这是什么原理,和总共30个循环有差别吗?
...

一般只改变退火的条件,在这个例子中就是退火时间加10s,其他不变
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
4楼2014-09-02 21:26:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by guoguo201209 at 2014-08-31 23:57:14
再问一下楼上,每个循环加10S是总共加10S,还是说变性,退火,延伸各加10S呢?不知这是什么原理,和总共30个循环有差别吗?
...

touchdown PCR倒是做过,每个循环降低退火温度。每个循环延长退火时间的,我也没做过。一般来说,退火时间太短可能会导致引物和模板结合不充分,退火时间增加有利于引物和模板退火,但也增加了模板两条链之间退火的概率。
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
5楼2014-09-02 21:34:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoguo201209

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hongqifei at 2014-09-02 21:34:18
touchdown PCR倒是做过,每个循环降低退火温度。每个循环延长退火时间的,我也没做过。一般来说,退火时间太短可能会导致引物和模板结合不充分,退火时间增加有利于引物和模板退火,但也增加了模板两条链之间退火的 ...

感谢楼上的回复,虽然还不明白是怎么回事
6楼2014-09-08 20:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoguo201209 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +7 land xuxu 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:44 by wxiongid
[考研] 317求调剂 +6 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 6/300 2026-03-27 00:22 by wxiongid
[考研] 化学308分求调剂 +5 你好明天你好 2026-03-23 5/250 2026-03-26 23:43 by 催化大白
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 10/500 2026-03-26 22:37 by 学员8dgXkO
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +7 NIFFFfff 2026-03-20 7/350 2026-03-26 20:45 by 不吃魚的貓
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 085600材料与化工306 +7 z1z2z3879 2026-03-21 7/350 2026-03-26 17:59 by fmesaito
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 315分,诚求调剂,材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
信息提示
请填处理意见