24小时热门版块排行榜    

查看: 1257  |  回复: 4

曼妥思薄荷糖

新虫 (初入文坛)

[求助] 求教:是否需要克隆测序,还是仅PCR测序就足够了? 已有4人参与

我从环境中分分离某种目的细菌,对样品分离纯化后,提出DNA后进行测序,是否需要克隆测序,还是仅PCR测序就足够了?谁能给我说说两者的区别,克隆测序是否有必要?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RuyangHan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你的目的是什么? 假如就想知道序列,PCR测序就够了。PCR测序测定是你PCR扩增出来的DNA片段(包括很多拷贝),克隆测序的话是把PCR产物其中一个片段连到载体然后在细胞中有复制了很多质粒,然后用质粒做底物来测序,所以克隆测序就是测其中的一个片段。
2楼2014-08-27 12:46:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
曼妥思薄荷糖(dllchina代发): 金币+2, 正解 2014-08-27 22:20:04
简单来说,克隆测序就是最后得出的序列包括你的引物,直接测序序列前后50左右的碱基是不准确的,没有引物序列。你要是个准确鉴定或发文章用,最好作个克隆,但成本高一些。
学习使你立于不败之地
3楼2014-08-27 17:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
单向PCR是初步鉴定,决定是否要当做新种的前一步,还有就是别人寄给你菌种,测个单反应,验证一下。
克隆一般是为了构建系统进化树~(说明你前一步比对相似度很低~有新种的潜力)
4楼2014-08-27 22:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
曼妥思薄荷糖: 金币+18, ★★★很有帮助 2014-10-26 10:58:12
PCR产物可以做高通量测序,不过根据方法的不同需要使用特殊的引物和加入barcode序列。
克隆测序是将PCR产物连接到载体质粒上,质粒再通过转化进入感受态细胞,细胞拿去涂板,形成单菌落后,挑取单菌落拿去做Sanger测序。
环境来源的PCR产物不可以直接拿去做传统的Sanger测序,因为PCR产物不是来自单一纯菌,做不了Sanger测序
除非你已经分离得到了纯菌,PCR产物才能做Sanger测序
5楼2014-10-25 15:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 曼妥思薄荷糖 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见