应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 基因组DNA 酶切后条带不清晰，什么原因啊？
51/1返回列表
查看: 3199  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xm_liu

铁虫 (初入文坛)

[求助] 基因组DNA 酶切后条带不清晰，什么原因啊？ 已有6人参与

各位虫友，我提取的腺病毒基因组DNA，用Fsp I 酶切后条带很不清晰，不知道是什么原因，酶切体系是50ul，其中酶2ul，泳道1是marker，泳道2 是其他样品，泳道3 的DNA 是10ug，泳道4  20ug，泳道5 40ug，37℃，酶切过夜，约17h，谢谢大家了！

基因组DNA 酶切后条带不清晰，什么原因啊？
IMG_20140822_122802.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-22 14:41:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-26 21:25:47
引用回帖:
4楼: Originally posted by xm_liu at 2014-08-23 15:51:32
1、理论上应该切出13条带，也不应该是这么弱的或者弥散的呀；
2、切的是基因组DNA，不是质粒载体，不知道会不会切不完全，依你看这个结果有可能是DNA降解造成的吗？
3、根据酶的说明书，30ul体系用1000ngDNA，实 ...

弥散有几种可能，1，最开始提取的基因组DNA就有降解，这样的话无论你怎么切都会是弥散的。2，酶切在37度下的时间过长导致降解，可做两个实验对比一下排除这种可能。3，用其他公司的酶和你现在用的酶做个对比确定现在用的酶是没有问题的（我也遇到过类似现象即酶切带太弱，原因可能是公司为了赚钱把原装酶液稀释了或卖的是快过期的酶）。
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-24 11:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xm_liu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-22 20:56:29
我做过用双酶切切基因组的  是一片弥散的条带
但没做过用单酶切的 而且病毒没研究过
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-22 15:17:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xm_liu(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-22 20:56:41
1，从你的图中可以看出，样品DNA序列中可能有多个酶切位点，因此切出几条弱带及弥散。
2，其次，这个酶酶切的时间需要根据要求设定，普通酶切一般45分钟到2个小时足够了，你的样品过夜酶切，不晓得温度是否会对你的样品造成降解。
3，酶切样品为什么用不同浓度？根据酶的说明书来配比酶切体系和样品DNA即可哈。
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-22 17:28:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xm_liu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2014-08-22 17:28:40
1，从你的图中可以看出，样品DNA序列中可能有多个酶切位点，因此切出几条弱带及弥散。
2，其次，这个酶酶切的时间需要根据要求设定，普通酶切一般45分钟到2个小时足够了，你的样品过夜酶切，不晓得温度是否会对你的 ...

1、理论上应该切出13条带，也不应该是这么弱的或者弥散的呀；
2、切的是基因组DNA，不是质粒载体，不知道会不会切不完全，依你看这个结果有可能是DNA降解造成的吗？
3、根据酶的说明书，30ul体系用1000ngDNA，实际电泳效果不好，条带非常弱，不清晰，所以做了梯度
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-23 15:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-22 21:42 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭